胶质瘤中p53介导的MAGE-D4转录调控及其生物学功能研究

结题报告
项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    81560408
  • 项目类别：
    地区科学基金项目
  • 资助金额：
    37.0万
  • 负责人：
    张庆梅
  • 依托单位：
    广西医科大学
  • 学科分类：
    H1803.肿瘤细胞命运
  • 结题年份：
    2019
  • 批准年份：
    2015
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2016-01-01 至2019-12-31

项目摘要

Our previous study found that the overexpression of MAGE-D4 correlated with p53 in glioma tissues. In view of the fact that MAGE-D4 promoter enriches the consensus binding sites for p53, we speculated that p53 may be involved in MAGE-D4 fuction. Therefore, following contents will be studied: ① Transcriptional regulation of MAGE-D4 by p53. Up- and down- regulation or mutation of p53 will be established in glioma cell lines. Furthermore, the functional p53 binding sites will be screened and promoter activity of MAGE-D4 will be detected by dual-luciferase reporter assay. And MAGE-D4 expression will be observed by qRT-PCR and western blot. Then, EMSA and ChIP-PCR will be used to confirm the binding of p53 protein and the p53 binding sites within MAGE-D4 promoter. ② The influence of MAGE-D4 on glioma cell proliferation and apoptosis and its dependence on p53. up- and down- regulation of MAGE-D4 expression wil be established in different p53-type glioma cell lines. Furthermore, xenograft mouse model will be built. Cell proliferation, cycle,apoptosis and expression of p21, Bax and Bcl-2 gene will be detected in vitro and in vivo. The project will interpret the regulating mechanism and partial biological function of MAGE-D4 from p53 aspect and provide a basis for future glioma biotherapy targeting MAGE-D4.
我们前期研究发现胶质瘤高表达MAGE-D4并与p53相关；鉴于MAGE-D4启动子含多个潜在p53结合位点，推测MAGE-D4功能有赖于p53参与，故拟开展以下研究：①p53对MAGE-D4的转录调控：构建p53上调/下调/突变胶质瘤细胞株，通过MAGE-D4启动子报告基因载体筛选功能性p53结合位点，了解p53对MAGE-D4启动子活性的影响；用qRT-PCR和WB检测p53对MAGE-D4表达的影响；EMSA和ChIP-PCR确认p53与MAGE-D4启动子的结合；②MAGE-D4对胶质瘤细胞增殖和凋亡影响及其p53依赖性：构建MAGE-D4表达上调/下调胶质瘤细胞及其移植瘤动物模型，体内外检测MAGE-D4对不同p53表达状态细胞增殖和凋亡及其相关分子的变化。本项目从p53角度阐明MAGE-D4表达调控机制和部分生物学功能，为将来开发以MAGE-D4为靶标的胶质瘤生物治疗奠定基础。

结项摘要

本项目研究发现：① P53对MAGE-D4（D4）的转录调控：含潜在P53结合位点（P53BS）的D4核心启动子位于358 bp~+172 bp；成功构建野生型（P53Wt）/缺失型/突变型同一胶质瘤细胞株U87MG和A172, 转染D4核心启动子报告基因载体（含P53BS）发现P53Wt缺失和突变可显著增强D4启动子的活性，但转染缺失P53BS的D4核心启动子报告基因载体发现P53缺失对D4启动子活性无影响；进一步qRT-PCR和WB确认P53Wt缺失和突变显著提高D4 mRNA和蛋白表达；最后ChIP-qPCR证实P53Wt可与D4启动子结合，而P53Wt缺失使其丧失与D4启动子的结合能力，P53Wt突变则明显减弱其与D4启动子的结合能力。这些结果表明P53Wt对D4有转录抑制作用，而P53的缺失和突变导致胶质瘤D4升高。②D4对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响及其p53依赖性和分子机制初探：下调D4抑制U87MG和U251细胞增殖、迁移和侵袭，阻滞U251细胞周期于S和G2/M期并伴有凋亡增加，抑制U251裸鼠皮下移植瘤形成，但对U87MG细胞周期和凋亡无影响；相反，上调D4则促进SHG44和A172细胞增殖、迁移和侵袭，但对其细胞周期和凋亡无影响；D4可能以P53依赖的方式影响胶质瘤细胞周期和凋亡，而以非P53依赖的方式影响胶质瘤细胞增值、侵袭和迁移；进一步RNA-seq检测D4下调的U87MG发现390个差异表达基因，对这些差异基因进行GO注释和KEGG富集分析，初步筛选出与胶质瘤发生发展密切相关的一些基因及信号传导途径，为后续深入研究D4影响胶质瘤生物学行为的分子机制奠定了基础。总之，P53介导D4的转录调控且影响胶质瘤细胞周期和凋亡, 此外，D4也影响胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移等恶性生物学行为，因此将D4用于胶质瘤靶向生物治疗具有潜在的应用开发前景。

项目成果

期刊论文数量（10）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（1）
肝细胞癌中 miR-200a 的表达水平及其临床意义
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2018
  • 期刊：
    临床合理用药
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    邬慧贤;张庆梅;肖绍文;谢小薰
  • 通讯作者：
    谢小薰
人脑胶质瘤中TRIM27的基因表达及临床意义
  • DOI：
    10.15887/j.cnki.13-1389/r.2018.35.004
  • 发表时间：
    2018
  • 期刊：
    临床合理用药杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    郭高水;张庆梅;罗彬;闭水清;刘畅;陈芳;谢小薰;肖绍文
  • 通讯作者：
    肖绍文
黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)多克隆抗体的制备和应用
  • DOI：
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  • 发表时间：
    2017
  • 期刊：
    细胞与分子免疫学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    贺菽嘉;顾永耀;肖绍文;张庆梅;陈芳;罗彬;付骏;谢小薰
  • 通讯作者：
    谢小薰
miR-200 家族———一类新的结直肠癌相关基因
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2018
  • 期刊：
    基因组学与应用生物学
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    邬慧贤;张庆梅;肖绍文;谢小薰
  • 通讯作者：
    谢小薰
人脑胶质瘤中OIP5和CTCFL的表达及临床意义
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2016
  • 期刊：
    中国癌症防治杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    石蕾;张庆梅;付骏;罗彬;彭亚;陈芳;李希圣;肖绍文;谢小薰
  • 通讯作者：
    谢小薰

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其他文献

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  • DOI：
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  • 作者：
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  • 通讯作者：
    谢小薰
缺氧诱导因子-2ɑ通过血管生成素-2途径调控缺氧诱导血管形成的研究
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
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    --
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  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2016
  • 期刊：
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  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    赵英伦;张庆梅;谢小薰
  • 通讯作者：
    谢小薰

其他文献

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Circ-ZEB1.33/MAGED4介导PAI-2泛素化参与ECM重塑促胶质瘤进展的机制
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    地区科学基金项目

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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