第V结构域缺失型β2GPI抑制糖尿病视网膜血管新生的研究

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
30971393
项目类别：
面上项目
资助金额：
32.0万
负责人：
于珮
依托单位：
天津医科大学
学科分类：
H0708.糖尿病
结题年份：
2012
批准年份：
2009
项目状态：
已结题
起止时间：
2010-01-01 至2012-12-31

项目参与者：
于德民；齐建成；胡博杰；毋中明；张景云；汤云昭；陈睿；周赛君；
关键词：
Torrii大鼠血管新生糖尿病 β2-糖蛋白I 增殖型糖尿病视网膜病变

项目摘要

增殖型糖尿病视网膜病变是致盲的主要眼疾之一，但是目前缺乏有效防治药物。在首次发现并证实第V结构域缺失型β2糖蛋白I（DI-IV）可抑制人脐静脉内皮细胞血管新生的研究基础上，提出DI-IV通过竞争性结合VEGF受体-2（VEGFR-2）,下调PI3K/AKT、MAPK/ERK信号转导通路，从而阻抑血管新生的假说。本研究将进一步以人视网膜内皮细胞和自发性糖尿病Torii大鼠为研究对象，通过形态学、电生理学、免疫学、蛋白组学、抗体芯片技术等多种研究手段，分别从分子细胞水平和动物整体水平，深入探讨并揭示DI-IV抑制糖尿病视网膜新生血管形成的机理，为临床防治增殖型糖尿病视网膜病变奠定坚实基础，并有望为血管新生性疾病的防治提供一种天然的安全有效的理想药物；通过明确β2糖蛋白I第I结构域的功能区结构，可为进一步研发防治血管新生性疾病的药物提供新思路。

结项摘要

增殖型糖尿病视网膜病变是致盲的主要眼疾之一，但是目前缺乏有效防治药物。本研究在首次发现并证实第V结构域缺失型β2糖蛋白（DI-IV）抑制人脐静脉内皮细胞血管新生的研究基础上，探讨了DI-IV对糖尿病视网膜血管新生的影响及机制。本研究采用sf9昆虫细胞和bac-to-bac杆状病毒，建立第V结构域缺失突变型β2-GPI (DI-IV)的高效表达体系，联合Ni-NTA agarose亲和纯化进行蛋白的纯化和从人血浆中提取β2-GPI，通过plasmin酶解法获得第V结构域裂解型β2-GPI。以视网膜血管内皮细胞为研究对象，探讨了在高糖、高胰岛素、AGEs环境下，DI-IV对视网膜内皮细胞增殖、迁移和管腔形成的影响。采用实时定量PCR技术观察DI-IV对VEGF受体mRNA表达的影响。采用Western blot技术完成DI-IV对视网膜血管内皮细胞VEGFR-1和VEGFR-2受体磷酸化与细胞内MAPK-ERK1/2和PI3K-Akt-GSK-3β信号转导途径激活的影响。采用克隆技术及斑点杂交及免疫共沉淀技术探讨β2-GPI与内皮细胞作用靶分子的研究。以糖尿病SD大鼠及STD大鼠为研究对象，采用数字化眼底血管荧光造影（Digital fundus fluorescence angiography）在体观察DI-IV对视网膜内血液循环及新生血管的影响；运用光、电镜等形态学手段结合免疫组化技术观察DI-IV对糖尿病大鼠视网膜内皮细胞血管新生及其超微结构的影响；采用荧光实时PCR（Taqman探针）相对定量分析DI-IV对视网膜组织中VEGF及其受体mRNA表达的影响； Western 免疫印迹分析DI-IV对VEGF细胞内 MAPK-ERK1/2、PI3K- Akt-GSK-3β信号转导途径中信号蛋白激活的影响。 .研究结果表明β2-GPI与内皮细胞上膜联蛋白AII上的DII、DIII结构域结合，经下调VEGF信号通路MAPK-ERK1/2、PI3K- Akt-GSK-3β，发挥抗视网膜血管新生的作用。.本项目取得的成果：1.已发表论著13篇，其中在国内核心期刊发表论著11篇，发表SCI论著2篇。3篇英文论著已投稿，另3篇英文论著正在修稿待发表。.2.获得国家发明专利1项。3.获得天津市科技进步二等奖1项。.4.培养博士研究生1名，硕士研究生3名。