重组人肿瘤坏死因子β (rhTNF-β) 在大肠杆菌中的糖基化修饰及其抗肿瘤作用

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项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    30973549
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    31.0万
  • 负责人：
    师以康
  • 依托单位：
    山东大学
  • 学科分类：
    H3505.抗肿瘤药物药理
  • 结题年份：
    2012
  • 批准年份：
    2009
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2010-01-01 至2012-12-31

项目摘要

在空肠弯曲菌中存在寡糖基转移酶PglB，PglB能够催化多种糖链转移至具有特定氨基酸序列的蛋白上，产生N-糖蛋白。PglB所转移的糖链必须是焦磷酸酯(PP-Und)连接的糖链，而在大肠杆菌O抗原合成途径中产生PP-Und连接的糖链。本申请中我们将PglB参与的N-糖蛋白合成途径与大肠杆菌O抗原合成途径相结合，在大肠杆菌内生产氮乙酰葡糖胺(GlcNAc)单糖基化的人肿瘤坏死因子β（TNF-β）。我们将选取大肠杆菌K12，对其进行基因工程改造，使其能够合成并积累GlcNAc-PP-Und，同时共表达PglB和人TNF-β，使其产生具有GlcNAc单糖基化的重组人TNF-β (rhTNF-β)。我们还将对GlcNAc单糖基化对rhTNF-β抑瘤活性的影响进行研究。为了提高rhTNF-β的抗肿瘤活性而在大肠杆菌中对其进行糖基化修饰，本项目是一个具有潜在应用价值的创新性的探索研究。

结项摘要

在空肠弯曲菌中存在寡糖基转移酶PglB，PglB能够催化多种糖链转移至具有特定氨基酸序列的蛋白上，产生N-糖蛋白。PglB所转移的糖链必须是十一异戊烯焦磷酸脂质载体(Und-pp)连接的糖链，而在大肠杆菌O抗原合成途径中产生PP-Und连接的糖链。本项目我们将PglB参与的N-糖蛋白合成途径与大肠杆菌O抗原合成途径相结合，在大肠杆菌内生产氮乙酰葡糖胺(GlcNAc)单糖基化的人肿瘤坏死因子β（TNF-β）。我们构建了pglB的表达载体pQE-80L-Kan/pglB，TNF-β的表达载体pMAL-p2X/TNF-β以及TNF-β羧基端含有糖基化位点序列的表达载体pET22b/TNF-β-glycotag。 通过在waal基因缺失的E.coli W3110共表达，获得了TNF-β蛋白，但经检测，没有发现TNF-β蛋白进行糖基化。我们把含有pgl基因簇的载体pACYC184/pgl和pET22b/TNF-β-glycotag载体共表达与E.coli BL21菌株，也没有获得糖基化的TNF-β蛋白。糖基化位点处于蛋白的柔性区域或暴露于蛋白表面、UDP-GlcNAc的浓度、处于周质腔的目的蛋白的浓度等因素影响糖基化效率。我们将继续优化条件，或改变目的蛋白为原核蛋白，在大肠杆菌中表达多糖蛋白偶联疫苗。

项目成果

期刊论文数量（1）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
空肠弯曲菌蛋白糖基化系统及利用该系统在大肠杆菌中表达糖蛋白的研究进展
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    中华微生物学和免疫学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    韩茜倩;师以康;王凤山
  • 通讯作者：
    王凤山

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其他文献

蛋白质O-GlcNAc糖基化与肿瘤
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    肿瘤
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    张肖冰;师以康
  • 通讯作者：
    师以康
苯乙烯接触者尿中生物标志物的测
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    中华预防医学杂志，2006,40(2):121-123
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    邵华;师以康;程学美
  • 通讯作者：
    程学美
乳腺癌细胞蛋白质O-GlcNAc糖基化水平与紫杉醇抗肿瘤作用的关系研究
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2015
  • 期刊：
    中国生化药物杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    张肖冰;李慧;王凤山;师以康
  • 通讯作者：
    师以康

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师以康的其他基金

糖酵解关键酶己糖激酶及其O-GlcNAc糖基化修饰对肿瘤细胞Warburg效应的功能作用
  • 批准号：
    81272208
  • 批准年份：
    2012
  • 资助金额：
    75.0 万元
  • 项目类别：
    面上项目

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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