基于纳米颗粒-细胞DNA适配子方法检测体外CTC预测肝癌微转移的研究

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AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    30901387
  • 项目类别：
    青年科学基金项目
  • 资助金额：
    20.0万
  • 负责人：
    汪付兵
  • 依托单位：
    武汉大学
  • 学科分类：
    H2605.分子生物学检验
  • 结题年份：
    2012
  • 批准年份：
    2009
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2010-01-01 至2012-12-31

项目摘要

术后转移复发是导致肝细胞癌（HCC)预后不良的重要因素。肿瘤转移复发的过程是循环肿瘤细胞(CTC)定植生长的级联放大瀑布效应，筛选出特异结合转移肿瘤细胞表面分子探针检测CTC预测转移复发从而优化治疗方案，是HCC治疗预后好坏的关键。本项目将消减杂交原理引入SELEX筛选，以遗传背景相同但转移潜能有明显差异的两个肝癌细胞系MHCC97-L(低转移)和HCCLM3(高转移)分别为消减靶子和筛选靶子，筛选特异识别高转移潜能肝癌细胞HCCLM3而不识别低转移潜能肝癌细胞MHCC97-L的单链DNA适配子。将筛选出特异结合高转移肝癌细胞的DNA适配子耦联纳米磁珠，建立"纳米颗粒-适配子"方法检测肝癌肺转移外周血CTC。该项研究将获取特异结合高转移力肝癌细胞分子探针，为肝癌微转移的临床诊断提供可行的依据，同时也为进一步寻找肝癌细胞表面转移相关分子和肝癌肺转移的机理探索以及适配子靶向性治疗奠定理论基础。

结项摘要

我们以遗传背景相同但转移潜能有明显差异的两个肝癌细胞系，MHCC97-L（低转移）HCCLM9（高转移），分别为消减靶子和筛选靶子，采用消减cell-SELEX技术，筛选出特异识别高转移潜能肝癌细胞而不识别低转移潜能肝癌细胞单链DNA适配子。经过9轮筛选，分离、克隆、测序并获得6条适配子。经流式细胞和免疫荧光法等鉴定，有其中2条适配子与高转移肝癌细胞高亲和力结合，分别命名为LY-1、LY-13。通过体外合成LY-1适配子，经流式细胞和免疫荧光法鉴定，发现该适配子能特异结合高转移肝癌细胞，与低转移肝癌细胞、HepG2、Huh7、乳腺癌细胞、肺癌细胞、结肠癌细胞SW48、胃癌细胞、宫颈癌细胞HeLa、外周血白细胞WBC等均不结合。蛋白酶K消化细胞后经流式检测以及荧光法分析，LY-1适配子与高转移肝癌细胞结合位点在膜表面。量子点耦联LY-1适配子的功能化生物分子探针，可识别体外培养的高转移肝癌细胞以及肝癌肺转移动物模型裸鼠肝脏和肺脏组织切片中肝癌细胞。经临床验证发现，量子点耦联LY-1适配子的功能化生物分子探针可识别肝癌病人肝脏组织切片中高转移性肝癌细胞。FITC标记的适配子在流式细胞仪上可识别出外周血模拟环境中高转移肝癌细胞，基于LY-1适配子耦联磁颗粒的复合物可捕获外周血模拟环境中的循环肝癌细胞。

项目成果

期刊论文数量（1）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）

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其他文献

乙型肝炎病毒调节胰岛素样生长因子结合蛋白7表达的机制研究
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  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    祝成亮;李艳;汪付兵;刘芳
  • 通讯作者：
    刘芳

其他文献

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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