通过二次转化快速获得无筛选标记IGF-1/IGFBP-1叶绿体转基因生菜的研究

结题报告
项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    30972012
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    26.0万
  • 负责人：
    张应华
  • 依托单位：
    云南农业大学
  • 学科分类：
    C1506.蔬菜与瓜果生长发育
  • 结题年份：
    2012
  • 批准年份：
    2009
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2010-01-01 至2012-12-31

项目摘要

本研究旨在将胰岛素样生长因子-1（IGF-1）和胰岛素样生长因子结合蛋白-1（IGFBP-1）这两个具有重要功能的蛋白质因子转入生菜叶绿体，获得无筛选标记、高效表达的转基因生菜。.项目拟克隆生菜叶绿体rpoA基因两侧翼序列作重组片段，构建到aadA基因两端，转化生菜获得rpoA基因缺失白化体。构建新的表达载体，重组片段之间插入rpoA/IGF-1/IGFBP-1基因，片段外侧连接aphA-2（kan+）基因表达盒。转化上述白化体，瞬时表达Kan抗性，形成的愈伤组织转到不含抗生素的培养基上培养，获得无筛选标记并恢复绿色的转基因生菜。.研究将建立起新的叶绿体转基因筛选体系，即表型性状结合抗性对转化体进行筛选，实现快速同质化。IGF-1/IGFBP-1同时在植物体内表达，为将其用于基础研究和临床治疗提供理论依据。无筛选标记转基因植株的获得，有助于消除人们对转基因作物食用安全的担心。

结项摘要

胰岛素样生长因子1（IGF-1）是一种多功能细胞增殖调控因子，具有广泛的生物学效应，胰岛素样生长因子结合蛋白-1（IGFBP-1）通过与IGF-1的结合与释放，对IGF-1功能的发挥起着重要的调节作用。本研究旨在利用叶绿体能高效、安全表达外源蛋白的优势，在生菜叶绿体中表达IGF-1/IGFBP-1，以期为研究叶绿体表达系统并将其作为生物反应器生产IGF-1提供一种可能的途径。.项目主要进行了以下几个方面的研究工作：. 1、根据生菜叶绿体基因组序列，设计特异引物，PCR方法克隆了rpoA基因两侧翼片段作同源整合位点，构建了IGF-1/IGFBP-1叶绿体表达载体。对载体的有效性，进行了gfp基因原核表达验证。结果表明，gfp基因能够在质体特异性启动子Prrn及终止子TpsbA的调控下高效表达, 表达量约占总可溶性蛋白的45.6%，包涵体占菌体蛋白的47.5%。. 2、选择了22个品种的生菜，设计6-BA和NAA不同浓度组合，进行芽分化诱导培养，筛选出分化率高的品种，进一步作抗生素筛选培养，建立了Kan和aadA/spe两种生菜遗传转化筛选体系。. 3、进行了生菜核转化研究。以美国生菜“大速生”为试材，叶片为外植体，采用农杆菌介导法，将IGF-1基因成功导入生菜中。抗性芽进行4次连续筛选培养，获得的阳性植株进行了PCR及RT-PCR分子检测。结果15株抗性植株PCR检测，11株有目标条带。选取以PCR检测为阳性的植株进行RT-PCR检测，表明胰岛素生长因子-1在RNA水平上得到了表达。. 4、采用基因枪法进行了叶绿体转化研究。进行二次转化，第一次转化用pBaadA载体，采用30mg/L spe进行多轮筛选，筛选抗性转化体。第二次转化用pBrpoA-IGF-1/IGFBP-1载体，在含Kan 12 mg/L筛选培养基中进行筛选培养，形成的愈伤组织转到不含抗生素的培养基上进行培养。对部分转化植株进行了分子鉴定及表达产物检测，结果表明，生菜叶绿体中表达的IGF-1具有刺激成纤维细胞生长的活性。. 5、以本项目为研究内容，已毕业本科学生6名；毕业硕士研究生1名，另有2名在读。到台湾大学交流访问1人次。发表论文3篇，硕士论文1篇，已投稿3篇。.

项目成果

期刊论文数量（3）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
phbA基因对拟南芥质体转化及花粉表型分析
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    西北植物学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    杨正安;丁玉梅;吴兴恩;迟淑娟;何雍琴;张应华
  • 通讯作者：
    张应华
黑籽南瓜基因组可转化人工染色体(TAC)文库的构建及分析
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    农业生物技术学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    杨正安;丁玉梅;张应华;张兴国
  • 通讯作者：
    张兴国
不同浓度6-BA和AgNO_3对甘蓝叶片不定芽分化的影响
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    云南农业大学学报(自然科学版)
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    何雍琴;迟淑娟;杨正安;王仕玉;邵珠华;张应华
  • 通讯作者：
    张应华

数据更新时间：{{ journalArticles.updateTime }}

{{ item.title }}
{{ item.translation_title }}
  • DOI：
    {{ item.doi || "--"}}
  • 发表时间：
    {{ item.publish_year || "--" }}
  • 期刊：
    {{ item.journal_name }}
  • 影响因子：
    {{ item.factor || "--"}}
  • 作者：
    {{ item.authors }}
  • 通讯作者：
    {{ item.author }}

数据更新时间：{{ journalArticles.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者：
    {{ item.authors }}

数据更新时间：{{ monograph.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者：
    {{ item.authors }}

数据更新时间：{{ sciAawards.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者：
    {{ item.authors }}

数据更新时间：{{ conferencePapers.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者：
    {{ item.authors }}

数据更新时间：{{ patent.updateTime }}

其他文献

生菜质体表达载体构建及gfp基因原核表达分析
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2016
  • 期刊：
    西南农业学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    侯思明;许俊强;张应华;杨正安
  • 通讯作者：
    杨正安
全长转录组测序在植物中的应用研究进展
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2019
  • 期刊：
    植物遗传资源学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    赵陆滟;曹绍玉;龙云树;张应华;许俊强
  • 通讯作者：
    许俊强
基于Hydrus-1d模型的农田SPAC系统水分通量估算——以山西省运城市董村农场为例
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    地理研究
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    王鹏;宋献方;袁瑞强;韩冬梅;张应华;张兵;李保国
  • 通讯作者：
    李保国
新型基因编辑技术发展及在植物育种中的应用
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2018
  • 期刊：
    西北农业学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    王艳芳;苏婉玉;曹绍玉;张琳;吕霞;张应华;许俊强
  • 通讯作者：
    许俊强
类钙调蛋白在植物生长发育及逆境胁迫中的功能研究进展
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2018
  • 期刊：
    植物生理学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    曹绍玉;王艳芳;苏婉玉;张琳;张应华;许俊强
  • 通讯作者：
    许俊强

其他文献

{{ item.title }}
{{ item.translation_title }}
  • DOI：
    {{ item.doi || "--" }}
  • 发表时间：
    {{ item.publish_year || "--"}}
  • 期刊：
    {{ item.journal_name }}
  • 影响因子：
    {{ item.factor || "--" }}
  • 作者：
    {{ item.authors }}
  • 通讯作者：
    {{ item.author }}
empty
内容获取失败，请点击重试
重试联系客服
title开始分析
查看分析示例
此项目为已结题，我已根据课题信息分析并撰写以下内容，帮您拓宽课题思路：

AI项目思路

AI技术路线图

张应华的其他基金

胰岛素样生长因子-1在甘蓝叶绿体中表达的研究
  • 批准号：
    30571275
  • 批准年份：
    2005
  • 资助金额：
    19.0 万元
  • 项目类别：
    面上项目
云南野生蔬菜资源调查分析研究
  • 批准号：
    39560054
  • 批准年份：
    1995
  • 资助金额：
    7.5 万元
  • 项目类别：
    地区科学基金项目

相似国自然基金

{{ item.name }}
  • 批准号：
    {{ item.ratify_no }}
  • 批准年份：
    {{ item.approval_year }}
  • 资助金额：
    {{ item.support_num }}
  • 项目类别：
    {{ item.project_type }}

相似海外基金

{{ item.name }}
{{ item.translate_name }}
  • 批准号：
    {{ item.ratify_no }}
  • 财政年份：
    {{ item.approval_year }}
  • 资助金额：
    {{ item.support_num }}
  • 项目类别：
    {{ item.project_type }}
{{ showInfoDetail.title }}

作者：{{ showInfoDetail.author }}

知道了

AI项目解读示例

课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
关闭
close
客服二维码