抗CD40/CD45RB单克隆抗体和带血管骨髓干细胞移植协同诱导猴肾脏移植免疫耐受机理的研究

慢性排斥和免疫抑制药物的毒副作用是目前导致移植器官失功的最主要原因。诱导免疫耐受是克服这些问题的最佳方法。我们已经建立了鼠和猴的肾移植模型，鼠的带血管骨髓干细胞移植模型。并证实雷帕酶素和anti-CD45RB有协同诱导鼠心脏移植免疫耐受和延长猴肾存活期的作用。CD45RB单抗可以促进CD45RB细胞转化为有诱导耐受作用的T调节细胞。带血管的骨髓干细胞移植可诱导鼠心脏移植的耐受，并比传统的骨髓干细胞移植具有更强的诱导效果。拟建立猴肾和带血管骨髓干细胞的联合移植模型并应用CD45RB，CD40单抗和雷帕霉素诱导猴肾移植的免疫耐受。探索联合应用单克隆抗体阻抑共刺激分子诱导外周性免疫耐受和并同时用带血管骨髓干细胞诱导中央性耐受的可能性和机理。通过该研究可以在国际上第一次建立带血管骨髓干细胞诱导肾移植耐受的猴模型，可能会在猴移植模型上建立长期稳定的微嵌合和诱导T调节细胞而成功诱导移植免疫耐受。

诱导免疫耐受是器官移植的最终目标，但是目前在灵长类同种异体器官移植受体上尚未成功。我们既往的研究已经证明了一种新型的人鼠嵌合的抗α-CD45RB 单克隆抗体（6G3）可以显著延长同种异体猕猴肾脏移植的存活.该项目在此基础上，我们探讨联合应用最新的猴鼠嵌合的α-CD45RB 和α-CD40单克隆抗体的疗效。.猕猴肾脏移植受体动物接受两周抗体的治疗。α-CD45RB剂量为5-10毫克/每公斤体重，治疗时间为d-1,0,5,7然后每两周一次直到d29天。or α-CD40的治疗剂量为20→5 mg/kg iv，治疗时间为d-1,0,5,7,然后每周两次直到d58天。供体和受体经过检测证实为高度错配，6/9的动物MHC一类分子无等位基因。α-CD40单一抗体治疗组显著延长了移植器官的存活，存活时间为 n=3; POD 99, 111, 119，但是受体从术后65天开始表现了增加的血肌酐水平，同时在术后活检病理学显示有急慢性排斥的表现(biopsies POD 56, 82, 87). 联合治疗组表现了显著的不同，联合α-CD45RB 和 α-CD40可以诱导移植器官和动物的长期存活并在部分受体动物中诱导功能性耐受(n=6; POD 52, 53, 64, 148, >794, >1083). 更重要的是两只功能性耐受的动物长期持续的表现正常的肾脏功能肌酐指标长达794天和1083天(95-121 mmol/L)，无任何其他生理的不适而且术后系列程序活检病理学接近完全正常(POD 89, 434, 723). 关于耐受机理研究，我们观察到并证实α-CD40单独治疗可以降低代表激活状态的B细胞和树突状细胞表面的分子CD40, and CD80 and CD86的表达。更重要的发现是在联合α-CD40和α-CD45RB单克隆治疗组可以诱导明显的T细胞表面的CD45RB分子的亚型的转换，且显著增加了T调节细胞CD4+CD25+FoxP3+ 的比率(>2-fold vs. Pre-Tx)，这种重要的显现在α-CD40单独治疗组从未观察到。在体外试验中，接受联合治疗的受体动物的PBMCs表现了明确降低的混合淋巴细胞培养的反应性，特别是其中两只成功诱导耐受的受体动物和另外两只长期存活的受体中都可以检测出伴随存在的同种特异性CD25+ Treg调节细胞的明显增殖。

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