益气活血法调控多胺-自噬通路抗心肌缺血再灌注损伤的机制研究

Myocardial Ischemia reperfusion(IR) injury is the important causes of death，but the precise mechanism has not yet been elucidated. Polyamine has extensive biological functions. According to new research,polyamine regulated autophagy to execute cell protection,including enhancing the body resistance.Otherwise, It has not been reported in the myocardial IR injury at home and abroad that traditional Chinese medicine regulates endogenous polyamine synthesis which mediate autophagy. We found in the preliminary experiment:Jiawei Danshen decoction(JDT) based on Yiqi Huoxue therapy raised the expression of the polyamine synthetase ODC ,and raised the ratio of LC3Ⅱ/LC3Ⅰof autophagy body membrane protein in the myocardial IR injury. On this basis, we suppose that JDT promote endogenous polyamine synthesis of myocardial cells to regulate autophagy,and start cell protection after IR injury. To provide that hypothesis, we will copy the myocardial IR injury model at the whole, organ and cell lever. Then we will observe if JDT will promote endogenous polyamine synthesis to Induct autophagy/to protect mitochondria/to inhibit oxidative stress/to resistant apoptosis for protecting the IR myocardial cells,through supplying polyamine synthesis inhibitor, cell autophagy inhibitors or open mPTP dose at the same time. Our aim is to enrich the scientific connotation of the pathogenesis of "qi deficiency and blood stasis" and therapeutic principle of "Yiqi Huoxue therapy"in coronary heart disease, and provide scientific clinical diagnosis and look forward to new therapeutic targets for coronary heart disease.

心肌缺血再灌注（IR)损伤是人口死亡的重要原因，但其确切机制尚未阐明。多胺具有广泛的生物学功能，最新研究表明多胺调控自噬介导的细胞保护，此作用与其增强机体抗逆性相关。但有关中医药调控内源性多胺合成，介导IR心肌细胞自噬的研究，迄今国内外尚无报道。我们在预实验中发现，益气活血复方加味丹参饮上调IR心肌细胞多胺合成酶ODC基因表达，且自噬体膜标志蛋白 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上升，据此，我们推测："加味丹参饮通过促进心肌细胞内源性多胺合成，调节IR后自噬启动的细胞保护"。我们课题组从整体、器官和细胞水平，复制心肌IR损伤模型，通过给加味丹参饮处理的模型多胺合成抑制剂、细胞自噬抑制剂及 mPTP开放剂，探讨其是否通过促进内源性多胺合成，诱导自噬/保护线粒体/抑制氧化应激/抗凋亡，级联保护IR心肌细胞。本研究旨在丰富冠心病"气虚血瘀"病机和"益气活血"治则科学内涵，为心肌IR损伤治疗寻找新的治

心肌缺血再灌注（IR)损伤是人口死亡的重要原因，但其确切机制尚未阐明。加味丹参饮对心肌缺血再灌注有很好的保护作用，但其作用机制有待深入研究。本实验以心脏缺血再灌注损伤大鼠、缺氧再灌注损伤大鼠离体心脏和缺氧/再复氧损伤心肌细胞为模型，采用分子生物学等技术，从分子、细胞和整体水平，以细胞自噬中心，研究加味丹参饮保护心肌细胞缺血再灌注损伤的机制。研究结果表明：①以心肌IR大鼠为研究对象，加味丹参饮组适度调节大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞的自噬，改善心肌细胞结构。 IRI 组大鼠心肌细胞中 Beclin-1 和 Atg5 mRNA 表达水平及 Beclin-1 蛋白表达较假手术组显著升高 (P<0.01) ； 加味丹参饮组大鼠心肌细胞中 Beclin-1 和 Atg5 mRNA 表达水平及 Beclin-1 蛋白表达较 IRI 组显著降低(P<0.01) 。自噬的改变与多胺代谢和细胞凋亡相关。 ②以大鼠缺氧再灌注离体心脏为研究对象，与模型组比较，其中全方组、全方+雷帕霉素组能明显降低CK、LDH水平，全方+自噬抑制剂组能明显升高CK、LDH水平，预适应组有统计学意义（P＜0.05），缺血预试应处理轻度降低CK、LDH水平。与模型组比较，各组中Beclin-1、Atg5 mRNA 的表达结果，余组均显著下降(P ＜0.01)； Beclin-1、LC3B蛋白表达量，空白组为基数组，余组均显著下降(P ＜0.01)。③以缺氧/复氧H9C2心肌细胞。为研究对象，与模型组比较，加味丹参饮含药血清组倒置显微镜下心肌细胞形态变化及生长状况相似，上清液中LDH漏出率及CK活力无明显差异，含药含电镜下自噬泡明显增多，且心肌细胞内Atg5、Beclin1 mRNA基因水平及Beclin1、LC3蛋白表达增加，有显著性差异（P<0.05）。结论：加味丹参饮可促进心肌细胞内源性多胺合成，调节自噬，抗凋亡，级联保护IR心肌细胞。本研究丰富了冠心病“气滞血瘀”病机和“益气活血”治则的科学内涵，为临床治疗冠心病提供新思路。

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