基于细胞周期/端粒酶交互进行CDK4(+)/TERT(+)分型口腔黏膜黑色素瘤靶向治疗的实验研究

Oral mucosal melanoma (OMM) behaves more aggressive and has poor prognosis compared to cutaneous subtypes, and there are not well established protocols for treatment of OMM. Recently, novel therapeutic advances in targeted therapy informed us the need to investigate the potential targets in OMM. In previous work, we found recurrently amplified regions of 12q14 (57.9%, containing CDK4) and 5p15 (47.4%, containing TERT) in OMM. 30% percent OMM harbor both CDK4/TERT amplification and are associated with poor survival, indicating it is a molecular subtype with clinical relevance. We suspect that CDK4/TERT amplification are indication of targeted therapy. CDK4/TERT amplification could lead to cell cycle acceleration/telomerase activation and there is cross talk between the two. CDK4(+)/TERT(+) OMM may benefit from treatment that targeting cell cycle/telomerase. Our project is to clarify CDK4/TERT amplification's effect on OMM's behavior though cell and molecular study; and to define the effect of cell cycle/telomerase inhibitor on CDK4(+)/TERT(+) OMM through PDX models. Our result will be important for sratified therapy or precise therapy in OMM.

口腔黏膜黑色素瘤（OMM）易复发转移，缺乏有效治疗方法。靶向治疗是黑色素瘤治疗重要手段，但OMM中缺乏相应治疗靶点。寻找有效靶点是开展靶向治疗的关键所在。我们预先实验中发现OMM基因组改变以拷贝数变异为主，其中CDK4和TERT在OMM中存在高频扩增，是最重要的基因组变异事件之一。其中30%的OMM同时存在CDK4/TERT的扩增且预后较差，提示其是恶性程度较高的分子分型。我们推测CDK4/TERT扩增是OMM的有效治疗靶点，二者可介导细胞周期异常/端粒酶活化且存在交互协同作用，可能对端粒酶/细胞周期靶向治疗敏感。本项目计划通过FISH、靶基因测序、基因转染、细胞学实验等明确CDK4/TERT扩增对OMM生物学行为的影响；并通过PDX体内模型研究端粒酶/细胞周期单药/联合靶向治疗对其的抑制作用。我们的研究为在OMM中进行分层精准治疗奠定研究基础，有重要科学意义和应用前景。

口腔黏膜黑色素瘤（OMM）易复发转移，对化疗药物不敏感，免疫药物疗效也较皮肤恶黑明显为差，更缺乏常见靶向药物靶点突变。我们从寻找OMM靶点开发针对性靶向治疗的角度出发，用高通量测序在OMM中发现了CDK4和TERT的扩增是OMM中高频存在的基因组变异。为了探索针对CDK4和TERT的靶向治疗在OMM中的可行策略，我们首先在OMM的临床样本中展开分析，发现CDK4和TERT之间存在共存的现象，而两者和其他临床特征和分子变异（KIT突变等）无明显关联。接着我们把研究范围扩展到头颈黏膜黑色素瘤，我们发现CDK4和TERT扩增主要发生在OMM中，而在鼻腔鼻窦MM中罕见。FISH及IHC检测表明，CDK4和TERT扩增同其蛋白产物表达呈显著正相关，而和下游pRB、ki67等关联不显著，提示CDK4和TERT主要通过增加其蛋白产物量来发挥促癌作用。在利用OMM细胞系ME进行的细胞学实验中，敲减CDK4可以改变ME的细胞周期，抑制了G1-S期的转化；且CDK4被抑制后ME的端粒酶活性出现了下降，而TERT敲减后也能抑制G1-S期的转化，这提示CDK4对周期的调控通路和TERT对端粒酶的调控通路之间存在交互；也说明了CDK4扩增和TERT扩增可能通过促进细胞周期和维持端粒酶活性的方式参与了OMM的发生发展；在药物试验中CDK4抑制剂Abemaclib显示出了对ME剂量依赖性的抑制作用，而TERT抑制剂GRL163则无（可能是因为试验时间不够）；CDK4抑制剂同黑色素瘤经典化疗药物DTIC有协同抑瘤作用。我们的体内PDX模型未成功建立，不过有相关文献表明体内实验也支持CDK4抑制对CDK4异常OMM的抑瘤作用。结论，CDK4和TERT扩增在OMM中高频存在，靶向CDK4有潜在的转化价值。

内容获取失败，请点击重试