牛流行热病毒候选受体的鉴定及其与病毒蛋白结合位点分析

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AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    31502064
  • 项目类别：
    青年科学基金项目
  • 资助金额：
    21.0万
  • 负责人：
    侯佩莉
  • 依托单位：
    山东省农业科学院
  • 学科分类：
    C1802.兽医病毒学
  • 结题年份：
    2018
  • 批准年份：
    2015
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2016-01-01 至2018-12-31

项目摘要

Bovine ephemeral fever (BEF) is an acute febrile infection of cattle caused by bovine ephemeral fever virus of the Rhabdoviridae family and leads to severe economic losses to the cattle industry. The first step in rhabdoviruses infection requires the interaction between viral envelope glycoprotein G and cellular receptors. However, BEFV receptors are still unknown. Our previous studies have shown that five host cell membrane proteins could interact with BEFV G. In this study, BEFV putative receptors will be further identified by co-immunoprecipitation on the basis of host cell membrane proteins. The capability of virus binding and infection to sensive cells will change or not via silencing the putative receptor gene of sensive cells is used to further verify whether it is BEFV receptor. Infection experiment is used to further determine the role of BEFV putative receptor after expression of the gene on non-sensitive cells. Immunofluorescence localization of the virus and its receptors on the cell surface will be investigated if they could combine, and study the binding site by using gene fragmentation, site-specific mutagenesis and GST Pull-down technology.The study will find BEFV receptors and their binding sites between viral protein and receptors, which clarifys the mechanism of viral infection and lays the foundation for the development of antiviral drug.
牛流行热（BEF）是由弹状病毒科的牛流行热病毒（BEFV）引起的急性、热性传染病，给养牛业造成严重的经济损失。尽管弹状病毒主要是通过病毒G蛋白识别病毒受体而感染宿主细胞，但是目前BEFV的受体尚不清楚。我们已初步筛选出可与BEFV G蛋白结合的细胞膜蛋白5种，本研究拟在此基础上利用免疫共沉淀技术进一步验证BEFV G蛋白结合的病毒候选受体；沉默易感细胞上病毒候选受体基因，检测易感细胞是否对病毒感染有抗性，进而发现病毒受体基因；在病毒非敏感细胞上表达该基因，检测非敏感细胞是否对病毒感染变得易感，进而验证其在病毒感染过程中的作用；应用免疫荧光技术对BEFV G蛋白与病毒受体在细胞膜上的分布进行定位，分析两者作用的时空可能性；运用基因分段截短、突变并结合GST Pull-down技术确定病毒与受体的结合位点。本研究将发现BEFV受体及其与病毒结合位点，为阐明病毒感染机制及研制抗病毒制剂奠定基础。

结项摘要

牛流行热是由弹状病毒科的牛流行热病毒(Bovine Ephemeral Fever Virus，BEFV)引起的牛的急性、热性传染病，该病传播速度快、传染性强，给养牛业造成巨大的经济损失，是我国重点防控的牛疫病之一。病毒受体在特异性地介导病毒与细胞的结合、病毒的侵入方面发挥关键作用，弹状病毒主要是通过病毒G蛋白识别病毒受体而感染宿主细胞。本研究利用噬菌体肽库技术筛选出可与BEFV G蛋白结合的小分子多肽，通过比对分析包含多肽同源基序的细胞膜候选受体分子蛋白，在此基础上利用Pull down技术、免疫共沉淀技术进一步验证了BEFV G蛋白可与ANX-A2结合；应用免疫荧光技术观察BEFV G蛋白与ANX-A2可在细胞膜上进行定位。过表达ANX-A2基因，可促进BEFV的复制，相反，应用siRNA 沉默ANX-A2后可相应地抑制BEFV的增殖，验证了ANX-A2基因在BEFV感染过程中发挥重要的作用。同时，ANX-A2单克隆抗体竞争对BEFV感染BHK-21细胞具有一定的阻断作用。在病毒非敏感细胞上过表达ANX-A2，感染BEFV，与对照相比，BEFV可吸附进入非敏感细胞，进一步证实了ANX-A2可能在BEFV感染过程中发挥受体的功能。运用基因分段截短并结合GST Pull-down技术确定ANX-A2与病毒G蛋白结合的位点，初步检测到ANX-A2 C末端可与BEFV G1蛋白结合。本研究主要对BEFV感染的候选受体进行了相关验证，初步揭示病毒感染机制，为研制抗病毒制剂奠定基础，也为其他病毒受体的研究提供技术平台。发表论文6篇，其中SCI论文4篇，授权的国家发明专利1项，出版著作1部。

项目成果

期刊论文数量（5）
专著数量（1）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（1）
牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒和牛肠道病毒多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用
  • DOI：
    10.16303/j.cnki.1005-4545.2016.10.04
  • 发表时间：
    2016
  • 期刊：
    中国兽医学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    侯佩莉;王洪梅;何洪彬
  • 通讯作者：
    何洪彬
Biopanning of polypeptides binding to bovine ephemeral fever virus G(1) protein from phage display peptide library.
噬菌体展示肽库中与牛短暂热病毒 G(1) 蛋白结合的多肽的生物淘选
  • DOI：
    10.1186/s12917-017-1315-x
  • 发表时间：
    2018-01-04
  • 期刊：
    BMC veterinary research
  • 影响因子：
    2.6
  • 作者：
    Hou P;Zhao G;He C;Wang H;He H
  • 通讯作者：
    He H
MiR-3470b promotes bovine ephemeral fever virus replication via directly targeting mitochondrial antiviral signaling protein (MAVS) in baby hamster Syrian kidney cells
MiR-3470b 通过直接靶向幼仓鼠叙利亚肾细胞中的线粒体抗病毒信号蛋白（MAVS）促进牛短暂热病毒复制
  • DOI：
    10.1186/s12866-018-1366-6
  • 发表时间：
    2018-12-27
  • 期刊：
    BMC MICROBIOLOGY
  • 影响因子：
    4.2
  • 作者：
    Hou, Peili;Wang, Hongmei;He, Hongbin
  • 通讯作者：
    He, Hongbin
Development of a recombinase polymerase amplification combined with lateral-flow dipstick assay for detection of bovine ephemeral fever virus.
开发重组酶聚合酶扩增结合侧流试纸法检测牛短暂热病毒
  • DOI：
    10.1016/j.mcp.2017.12.003
  • 发表时间：
    2018-04
  • 期刊：
    Molecular and cellular probes
  • 影响因子：
    3.3
  • 作者：
    Hou P;Zhao G;Wang H;He C;Huan Y;He H
  • 通讯作者：
    He H
牛病毒性腹泻病毒致病分子机制的研究进展
  • DOI：
    10.13484/j.nmgdxxbzk.20170416
  • 发表时间：
    2017
  • 期刊：
    内蒙古大学学报(自然科学版)
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    侯佩莉;王洪梅;赵贵民;夏咸柱;李光鹏;何洪彬
  • 通讯作者：
    何洪彬

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其他文献

A型流感病毒PB1-F2蛋白的原核表达、纯化及鉴定
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2010
  • 期刊：
    湖北农业科学
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    李俊杰;侯佩莉;关振宏
  • 通讯作者：
    关振宏
A型流感病毒感染免疫应答中细胞因子的作用
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    动物医学进展
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    侯佩莉;张茂林;李影;关振宏
  • 通讯作者：
    关振宏
GST pull-down验证流感病毒PB1-F2蛋白与热休克蛋白40的相互作用
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    生物技术通报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    段铭;张茂林;李影;侯佩莉;关振宏
  • 通讯作者：
    关振宏

其他文献

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

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          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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