小鼠肾脏主动钙转运机制的研究
项目介绍
AI项目解读
基本信息
- 批准号:20972046
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:36.0万
- 负责人:
- 依托单位:
- 学科分类:B0702.生物分子的化学生物学
- 结题年份:2012
- 批准年份:2009
- 项目状态:已结题
- 起止时间:2010-01-01 至2012-12-31
- 项目参与者:康红; 谢靖; 李洋; 何杰; 张超杰; 顾晓文; 唐梅徕; 范培芝; 雷姗姗;
- 关键词:
项目摘要
肾脏远曲小管细胞的主动钙转运由离子钙与胞浆内维生素D依赖的钙结合蛋白Calbindin D9k和Calbindin D28k结合、移动至基底膜后排出。然而,胞浆内钙的分子转运机制及Calbindins的作用大小并未完全清楚。本项目构建维生素D受体(VDR)/Calbindin D9k和Calbindin D9k/Calbindin D28k双基因剔除鼠,检测包括对照组在内七种不同基因型鼠的血尿参数值、骨质和甲状旁腺等的变化,再分离肾小管细胞,提取mRNA和蛋白质,运用基因芯片和蛋白质芯片、Real time PCR和Western杂交等技术检测相关基因mRNA和蛋白质的表达。通过组间比较分析,发现所有参与钙转运的基因和蛋白。不仅验证Calbindins的作用,并发现新的基因蛋白。从而阐明小鼠肾脏远曲小管胞浆内主动钙转运的分子机制,为骨质疏松症、佝偻病等的预防和治疗提供新的思路和途径。
结项摘要
一、方法:通过构建VDR SiRNA慢病毒质粒,将其转染小鼠肾小管上皮细胞,利用荧光定量检测α-SMA mRNA 表达;利用MTT法检测肾小管上皮细胞增生情况,将肾小管上皮细胞分成空白对照组、5×10-8 M 的 1,25(OH)2D3组、1×10-7 M 的PTH组、5×10-8 M 的 1,25(OH)2D3与1×10-7 M 的PTH组4组,利用基因芯片检测包括Calbindin-D9k对Calbindin-D28k、TRPV5/6、VDR、NCX1、PMCA1b在内的各组细胞全基因表达;利用免疫组化技术检测肾病综合征患儿肾组织中CaSR表达。结果:成功分离了肾小管上皮细胞,Calbindin-D9k SiRNA可有效抑制肾小管上皮细胞中Calbindin-D9k基因与蛋白表达;基因芯片结果显示:Calbindin-D9kSiRNA组与正常组相比:表达上调基因数为2567个,表达下调基因数为2568个;在TRPV5、TRPV6、Calbindin-D9k和Calbindin-D28k等维生素D依赖的靶蛋白中, Calbindin-D9k部分抑制后,仅TRPV6出现表达差异;在肾病综合征患儿肾组织中,CaSR表达增高,并与钙磷代谢紊乱、肾小管间质损害程度正相关。.二、探讨肠道肿瘤进程中维生素D与APC/β-catenin的信号通路之间的交互关系。合并维生素D受体失活的APCmin/+小鼠通过交配传代获得,比较不同年纪大小的APCmin/+和APCmin/+VDR-/-小鼠肠道肿瘤的发生、发展情况,3,4,6,7月龄的两组小鼠的小肠和结肠肿瘤的数目无明显差异,然而,所有年纪APCmin/+VDR-/-小鼠肿瘤的大小明显增加。免疫染色显示APCmin/+VDR-/-小鼠肠道肿瘤的β-catenin, cyclin D1, 磷酸化的Stat-3和MSH-2表达明显增强,而Stat-1表达降低。这些数据显示VDR信号通路抑制肠道肿瘤的生长而不是其发生,APCmin/+VDR-/-小鼠肠道肿瘤增长的势头似乎是由于VDR生长抑制作用的丧失引起。
项目成果
期刊论文数量(9)
专著数量(0)
科研奖励数量(2)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
CXCL10/CXCR3与乳腺癌关系的研究进展
- DOI:--
- 发表时间:--
- 期刊:医学临床研究
- 影响因子:--
- 作者:段波峰;郑维
- 通讯作者:郑维
钙化与乳腺疾病的关系
- DOI:--
- 发表时间:--
- 期刊:中国医师杂志
- 影响因子:--
- 作者:张芡;何悦;郑维
- 通讯作者:郑维
血中维生素D、血钙以及钙敏感受体与乳腺癌关系的研究进展
- DOI:--
- 发表时间:--
- 期刊:中国医师杂志
- 影响因子:--
- 作者:叶俊;郑维
- 通讯作者:郑维
钙化与甲状腺癌的关系
- DOI:--
- 发表时间:--
- 期刊:医学理论与实践
- 影响因子:--
- 作者:张磊;郑维
- 通讯作者:郑维
维生素D受体在肠道肿瘤生长中与-catenin通路之间的关系
- DOI:--
- 发表时间:--
- 期刊:中国医师杂志
- 影响因子:--
- 作者:康红;郑维;谢靖;李洋;张超杰;唐梅徕;范培芝
- 通讯作者:范培芝
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- DOI:--
- 发表时间:2016
- 期刊:南京工业大学学报( 自然科学版)
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- 作者:郑维;陆伟东;刘伟庆
- 通讯作者:刘伟庆
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