中药通腑养髓法保护Wilson病tx小鼠模型神经元损伤的细胞信号机制

肝豆状核变性(WD)是少数可治性遗传性铜代谢障碍疾病，申请者单位在治疗4000余例WD过程中，发现大多患者存在多种不同程度的脑损害症状，其中部分病程较长的脑型病例，即使得到比较及时的治疗，其神经症状仍难以逆转，严重影响了患者的社会学习工作能力。基于30余年来积累的WD临床和基础研究，根据中医整体观念并结合现代医学对铜代谢障碍研究以及中医药神经保护机制研究的最新进展，依 "通腑养髓" 治法重组具中药神经保护剂之肝豆汤改良方，采用差速离心法和RT-PCR、West blot等技术观测其对WD遗传模型TX小鼠脑组织额皮质、纹状体的铜诱导神经元胞内外ASM、CER信号蛋白通路的亚细胞定位和表达水平的影响，以期解释其对铜诱导神经元损伤的保护是通过调控神经元细胞膜内外神经酰胺信号通路得以实现，将可能为临床中医药治疗脑型WD患者的早期干预和损伤后神经保护、再生修复提供新的治法治则思路。

Wilson病(WD)是少数可治性遗传性铜代谢障碍疾病，本单位在治疗4000余例WD过程中，发现大多患者存在不同程度的脑损害症状，其中部分病程较长的脑型病例，即使得到比较及时的治疗，其神经症状仍难以逆转，严重影响了患者的社会学习工作能力。本项目基于30余年积累的WD临床和基础研究，根据中医整体观念并结合现代医学对铜代谢障碍研究以及中医药神经保护机制研究，依“通腑养髓”治法重组具中药神经保护剂之肝豆汤改良方，采用RT-PCR和Western blot等技术观测其对WD遗传模型TX小鼠脑组织铜诱导神经元膜内外神经酰胺信号通路相关蛋白及基因表达水平的影响，以期解释其对铜诱导神经元损伤的保护是通过调控神经元膜内外神经酰胺信号通路得以实现，将可能为临床中医药治疗脑型WD患者的早期干预和损伤后神经保护、再生修复提供新的治法治则思路。实验表明：1）铜在TX小鼠脑组织的过度蓄积，可引起TX小鼠神经行为学异常，而肝豆汤改良方可降低评分；2）肝豆汤改良方可降低TX小鼠脑组织铜的含量及调节锌的代谢；3）肝豆汤改良方可改善TX小鼠的肝功能，表明肝豆汤改良方能改善铜对肝脏引起的损害，且不良反应较低；4）肝豆汤改良方可下调TX小鼠脑组织内ASM、CER、P38、 JNK 、Caspase 9及Caspase 3等蛋白的表达，上调TX小鼠脑组织内XIAP蛋白的表达，是改善脑组织损伤的重要原因； 5）肝豆汤改良方改善脑组织损伤与丁苯酞有相似的疗效，但其作用机制不同，为临床治疗WD 提供一定的理论依据。研究结果显示：1）含肝豆汤改良方兔血清可显著降低TX乳鼠神经元内铜含量，是其保护神经元的主要原因；2）含肝豆汤改良方兔血清可显著减少TX乳鼠神经元内ASM、Cer、PKC、JNK、P38、Caspase 3、Caspase 9及Cyto C蛋白,增加TX乳鼠神经元内ERK1/2及XIAP蛋白，表明高铜诱导神经元细胞凋亡的氧化应激和线粒体损伤的分子信号机制与诱导神经元凋亡的神经酰胺信号通路有密切关联；同时表明肝豆汤改良方具有一定的神经保护作用，为临床上WD特别是脑型的治疗提供重要依据。本研究从分子水平初步阐明了肝豆汤改良方保护铜诱导神经元损伤细胞内外神经酰胺信号通路的调控机制，为从现代医学角度对中医通腑利湿、活血养髓法防治WD的治法提供理论依据，并为中医药治疗其它铜相关神经遗传变性疾病提供新的治法思路。

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