LncRNA-N1LR基于N1LR/eIF4B/Nck1/p53通路对缺血性脑卒中的神经保护作用

Long non-coding RNAs (lncRNAs) play important roles in pathological and physiological processes. However, stroke-responsive lncRNAs have been rarely reported. In our previous study, we identified a lncRNA N1LR that can promote neuroprotection in ischemic stroke probably by the inhibition of p53 phosphorylation. Furthermore, we demonstrated that N1LR can inhibit the translation of its homologous protein-coding gene Nck1，and the bioinformatics analysis showed that several potential eIF4B-binding sites were included in N1LR sequence. So we assume that N1LR may inhibit the translation of Nck1 through its interaction with eIF4B and therefore inhibits the phosphorylation of p53 protein and exerts neuroprotective effects against ischemic stroke. In the present study, we will try to uncover the mechanism of the neuroprotection of N1LR in the Oxygen-Glucose Deprivation/Reoxygenation (OGD/R) model of primary cultured neurons from mouse cerebral cortex. We will firstly verify the interaction of N1LR and eIF4B, and then we will study whether eIF4B is crucial for the neuroprotective effects of N1LR. We will try to explore whether the neuroprotection of N1LR depends on the axis of N1LR/ eIF4B /Nck1/p53. Before that, the function of Nck1 in ischemic stroke will be assessed. This study may expand the field of functional biology of lncRNAs and provide new insights into the ischemic stroke.

长链非编码RNAs（lncRNAs）具有重要的病理生理功能，但其对缺血性脑卒中的作用尚不清楚。我们前期发现lncRNA-N1LR可通过抑制p53蛋白磷酸化来保护缺血性脑卒中受损神经元；同时，N1LR可抑制与其同源的蛋白编码基因Nck1的翻译；N1LR具有多处潜在的翻译起始因子eIF4B结合位点。因此我们设想N1LR通过与eIF4B结合来抑制Nck1的翻译，从而抑制p53蛋白磷酸化，发挥神经保护功能。我们拟在胎小鼠脑皮层神经元氧糖剥离模型中验证N1LR与eIF4B的结合，证明N1LR削弱eIF4B与Nck1 mRNA的结合以抑制Nck1的翻译，从而保护缺血损伤神经元；观察Nck1对缺血损伤神经元中p53蛋白磷酸化的影响，进一步阐明N1LR/eIF4B/Nck1/p53通路保护缺血损伤神经元的分子机制。本课题可在lncRNAs水平获得缺血性脑卒中神经元损伤新机制，为治疗缺血性脑卒中提供新思路。

脑卒中是一类因脑部血流供应障再引起脑组织损伤的脑血管疾病，包括缺血性和出血性卒中，具有发病率高、死亡率高和致残率高的特点。NCK家族蛋白是一类重要的衔接蛋白，Nck蛋白参与调控细胞骨架的重排，有报道称DNA损伤诱导Nck1蛋白由胞质转移到胞核，促进p53蛋白的磷酸化，从而促细胞凋亡。提示我们，抑制Nck1蛋白表达，减少Nck1入核，可能能够在缺血性脑卒中后发挥神经保护作用。本研究星形胶质细胞是哺乳动物神经系统中分布最广泛的一类细胞。星形胶质细胞对正常神经元活动具有至关重要的功能，且可以在缺血期间促进神经元存活，并在损伤后促进轴突生长和再生。本研究旨在探索Nck1在缺血性脑卒中病理过程中对神经元及星形胶质细胞的作用及其可能的作用机制。. 本实验中，我们建立了氧糖剥离/再灌注损伤（OGD/R）模型，采用CCK-8法、实时荧光定量PCR、蛋白质免疫印迹法、流式细胞术、免疫共沉淀联合质谱分析技术等实验技术测定细胞活力、细胞凋亡、筛选Nck1蛋白相互作用的蛋白等。结果显示，Nck1在氧糖剥离/再灌注损伤（OGD/R）的小鼠神经母细胞瘤细胞（N2a细胞）和小鼠星形胶质细胞系（MA-C细胞）中具有截然相反的功能。OGD6h/R24h后，N2a细胞内Nck1的表达升高，敲低Nck1增加了N2a细胞的活力，减少细胞凋亡，减少了氧自由基及活性氧的生成，提示Nck1是OGD/R损伤的N2a细胞的损伤因子；而在MA-C细胞中，OGD6h/R24h可诱导Nck1的表达降低，敲低Nck1增加了细胞凋亡比例，增加了氧自由基及活性氧的生成，提示Nck1在OGD/R损伤的MA-C细胞中是保护因子。采用蛋白质免疫共沉淀联合质谱鉴定的方法，对正常和OGD/R损伤的N2a细胞中与Nck1蛋白相互作用的蛋白质进行鉴定，发现共49个OGD/R损伤特异性的蛋白质，经GO分析，这些蛋白质参与多种重要的细胞过程。后续将进行Nck1蛋白的亚细胞定位，结合GO的分析结果探索其在氧糖剥离/再灌注损伤神经元中的作用机制。Nck1可能是治疗脑缺血性脑卒中的新靶点。

内容获取失败，请点击重试