基因拷贝数变化在TEL/AML1+儿童急性白血病中作用的研究

With the development of molecular biology techniques, submicrosopic structural variants have been found abundantly existing in human genome. The copy number variations (CNVs) are effecting genes expression and leading to the diversity of disease susceptibility,drug response and individual phenotype. Also of note, according to the relationship between CNVs and disease, the reason of some diseases had been found. Recently, more than 50 recurring genetic alteration have been identified in childhood acute lymphoblastic leukemia (ALL). These frequently involve genes with known or putative roles in lymphoid development and leukemogenesis. It is well known, that the TEL/AML1 fusion gene frequently originates before birth, probably as an initiation lesion. Additional, postnatal mutations are necessary for progression to overt malignancy. In addition, the outcome may be difference although the patients have the same risk group. We will evaluate Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA) and quantitative multigene fluorescence in situ hybridization (QM-FISH) on childhood ALL for the detection of the most common CNVs. Furthermore, we will study the role of CNVs in leukemogenesis and the outcome.

基因组内拷贝数变异(copy number variations，CNVs)可能是疾病机制的一个普遍来源。CNVs与自身免疫性疾病、感染性疾病等多种复杂疾病均有关，不仅影响疾病的易感性及发展进程，还可以通过影响药物代谢使个体的疗效产生差异。更为有意义的是，从基因拷贝数变异图谱与疾病的关联入手，找到了重大疾病的病因，促进了新药研究的发展。最近的基因组学研究显示：在儿童急性淋巴细胞白血病中，常发生涉及淋巴细胞分化及细胞周期调控的基因拷贝数的异常。众所周知，TEL/AML1+融合基因起源于宫内，仅有这一染色体易位不足以引起白血病，需要有"二次打击"才能致病。且TEL/AML1+急性淋巴细胞白血病的预后并不完全一致。本项目联合应用多重连接探针扩增技术以及单细胞定量多基因荧光原位杂交技术检测儿童TEL/AML1+ALL中多个常见基因拷贝数变化，研究基因拷贝数的变化与白血病发病机制及预后的相关性。

急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）是儿童血液系统疾病中最常见的肿瘤。基因组学研究显示：在儿童急性淋巴细胞白血病中，常发生基因拷贝数的异常(copy number variations，CNVs)，肿瘤细胞存在异质性。我们应用多重连接探针扩增技术（MLPA）检测在儿童ETV6/RUNX1+急性淋巴细胞白血病（ALL）中基因拷贝数变异的情况。回顾性分析2006年1月至2012年11月95例ETV6/RUNX1+ALL患儿临床资料。95例患儿中，73例（76.8%）检测到基因拷贝数的改变。每例患儿基因拷贝数变异个数的中位数为1个（0-6）。拷贝数变异率超过10%的基因为EBF1、CDKN2A/2B、PAX5、ETV6、BTG1。CDKN2A/2B缺失、ETV6扩增及BTG1缺失的患儿年龄偏大。EBF1扩增、PAX5扩增、ETV6扩增的患儿易发生复发。FISH技术检测ETV6基因拷贝数的结果与MLPA检测结果的相符率为66.3%。应用FISH与MLPA两种检测方法结果差异最大的部分为MLPA检测ETV6基因有扩增/缺失，而FISH检测结果正常，占23.2%。48例患儿的标本进行了QM-FISH检测。初诊时为1个克隆的患者有34例（70.8%），2个克隆的患者有9例（18.8%），3个克隆以上的患者有5例（10.4%）。患儿的肿瘤细胞存在异质性，各亚克隆之间呈线性或树枝状演化。复发克隆可能与初诊时克隆一致，也可能为新出现克隆。复发克隆为新出现克隆的患儿预后更差，对于这一类患儿患儿应当加强治疗，改善预后。

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