原发性骨髓纤维化造血干细胞生物学特征和分子演变研究

Primary myelofibrosis (PMF) is one kind of hematopoietic stem cell-derived clonal myeloproliferative neoplasms. The literatures reported that the abnormal mobilization and homing of neoplastic hematopoietic stem cells in the spleen and liver commonly cause hepatomegaly and symptomatic splenomegaly. The discovery of JAK2V617F mutation has been the most important contribution to the knowledge on the pathogenesis of PMF in recent time.JAK2 inhibitors have been proved to have significant activity in myelofibrosis during the past several years.For the past several decades there has been strong observational data supporting a stem cell model for multiple cancer cells, but we still don't know the mechanism of hematopoietic stem cell dysfunction on the origing and progress of PMF. Our primary data showed that the clinical and laboratory characteristics of PMF in Chinese are different from that in western countries(Blood. 2012,119 (11) : 2469-2473). In order to explore new diagnostic and therapeutic tragets, the evolution of hematopoietic stem cell during the occurrence and progression of PMF using the function anlysis of hematopoietic stem cell of PMF patients and ASXL1、IDH1/2 and SRSF2 gene mutations will be studied.

原发性骨髓纤维化（PMF）是一种起源于造血干细胞的克隆性恶性髓系肿瘤。已有研究发现PMF患者造血干细胞趋化等细胞生物学功能异常，其向脾脏异常迁移并建立髓外造血，导致肝脾肿大。近来JAK2V617F突变的发现及JAK2抑制剂的问世，开启了对其发病分子机制和治疗新时代，但对其恶性造血干细胞特征仍知之甚少。我们此前发现中国PMF患者具有有别于西方国家患者的一些临床和实验室特征(Blood. 2012,119 (11) : 2469-2473)。本课题在这些前期原创性研究发现的基础上得以提出，拟通过体内、外PMF患者造血干细胞功能分析，以及ASXL1、IDH1/2、SRSF2基因突变谱系等研究，旨在初步阐明PMF造血干细胞在疾病发生及病程不同时点的细胞和分子生物学特征的演进规律，以期为PMF患者寻找新的诊治分子靶标。

原发性骨髓纤维化（PMF）是一种起源于造血干细胞的克隆性恶性髓系肿瘤。已有研究发现PMF患者造血干细胞趋化等细胞生物学功能异常，其向脾脏异常迁移并建立髓外造血，导致肝脾肿大。首先对182例PMF患者进行了JAK2V617F及ASXL1基因突变进行检测，分析其与PMF患者临床及脾肿大的相关性；应用二代测序技术，明确我国PMF患者亚克隆基因突变谱系。并顺利应用RNA 干扰技术构建靶向ASXL1 的特异性干扰载体，稳定转染UKE1、SET2及HL-60 细胞系，并应用Western Blot 及Real time PCR 对干扰细胞系进行ASXL1、CXCR4 蛋白及mRNA 水平的鉴定。应用CCK8 法对细胞的增殖情况分析；应用甲基纤维素进行克隆形成实验检测单细胞克隆形成能力。应用Transwell ssay 检测细胞迁移能力改变；应用流式细胞术检测细胞膜表面CXCR4 表达情况。结果表明ASXL1 敲降的JAK2V617F 突变细胞系（UKE1、SET2）均存在CXCR4 表达增高，细胞迁移能力增强，提示ASXL1 突变可能参与作用于SDF-1/CXCR4 轴。我们据此推测，在JAK2V617F 突变的背景下，ASXL1 突变可能通过直接或间接作用于SDF-1/CXCR4 轴而使增强肿瘤干细胞的异常迁移的生物学功能，参与骨髓纤维化和促进肿瘤微环境的形成，从而引起了MPN 患者髓外造血、脾脏肿大等症状的产生。进一步临床研究发现我国PMF患者染色体核型谱系和常见染色体核型的预后意义，提出了一个有别于DIPSS-Plus染色体预后分组的新的分组。与西方白人患者相比我国PMF患者：（1）CALR基因突变以Ⅱ类突变为主；（2）CALRⅡ类突变的患者较伴有JAK2V617F突变患者总生存期明显缩短且是独立的不良预后因素。进一步经多因素分析提出了中国PMF患者的动态国际预后积分系统（DIPSS-Chinese）分子预后积分系统。我们还证明PMF患者骨髓纤维化程度（MF-0/1vs MF-2/3）是独立于DIPSS预后积分系统的预后评估指标。研究结果提高了我们对PMF的发病机制的深入认识，并提高了临床上对我国PMF患者的诊断、预后判断的准确性，为临床上基于预后分层提出的治疗策略的制定奠定基础。

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