人聚合酶Pol δ小亚基p12生化功能研究

结题报告
项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    30970612
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    30.0万
  • 负责人：
    周亚竟
  • 依托单位：
    江苏大学
  • 学科分类：
    C0505.蛋白质、多肽与酶生物化学
  • 结题年份：
    2012
  • 批准年份：
    2009
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2010-01-01 至2012-12-31

项目摘要

人DNA聚合酶Pol δ是真核生物染色体DNA复制过程中的一个主要复制酶，并在参与其它多种形式DNA修复过程中起着关键作用。目前普遍认为，人Pol δ是由四个亚基p125、p50、p68和p12构成的异源四聚体，推测小亚基p12有可能在DNA复制和损伤修复过程中调控着Pol δ的酶学功能以保证DNA复制的准确性，避免染色体突变的发生。本项目拟通过分析小亚基p12在DNA复制过程中的酶学功能，研究p12活性区域对Pol δ-DNA合成的调控，以明确p12对Pol δ-DNA复制的调控机制。同时，通过观察各亚基在细胞亚核内DNA损伤点上的共定位，阐明细胞内p12在Pol δ-DNA损伤应对响应机制中的作用。这些研究将对我们了解人类疾病和癌症的发病机理以及发现新的诊断治疗手段方面具有十分重要的意义。

结项摘要

人源DNA聚合酶δ（Pol δ）是真核生物染色体DNA复制过程中主要复制酶之一，并在参与多种形式DNA修复过程中起着关键作用。目前普遍认为，人源Pol δ是由p125、p50、p68和p12四个亚基构成的异源四聚体，推测p12有可能在DNA复制和损伤修复过程中调控着Pol δ的酶学功能以保证DNA复制的准确性。本基金项目研究通过建立人源Pol δ大规模制备和分离纯化平台，对所获得的Pol δ各亚基不同组合的蛋白复合物进行体外生化功能分析：在Poly(dA)/oligo(dT)为引物/模板和单链M13 DNA模板上的DNA活性分析显示，缺失了p12的三亚基蛋白复合物的活性与全酶相比均有显著下降，揭示了p12在DNA复制过程中扮演着十分重要的角色；通过比较由尿嘧啶引发DNA损伤模板上的碱基切补修复活性，发现p12具有调控Pol δ单核苷酸切补修复与多核苷酸切补修复比例的功能；首次证实了p50也能和PCNA发生捆绑反应，并以此为依据，提出了一个新的Pol δ-PCNA蛋白复合物之间相互反应的网络模型。同时，本基金项目也对小亚基p12的多泛素化修饰途径进行了初步探索：通过由四个不同性质层析柱组成的E3查找系统，成功地鉴定出唯一能介导p12多泛素化反应的E3连接酶 RNF8，其相应的E2/E3调控途径为Ubc13/Uev1a/RNF8；在应用免疫亲和层析柱查找由UV引发DNA损伤的细胞内与Pol δ形成复合物的相关蛋白时，也鉴定出RNF8是一个Pol δ的关联蛋白，实验表明RNF8是通过四个亚基与Pol δ发生捆绑反应，它与E2交联酶UbcH5c协同介导p50亚基单泛素化反应；亚细胞共定位实验发现，Pol δ和RNF8以共定位方式被募集到由UV射线引起的DNA损伤区域。以上研究初步明确了小亚基p12在Pol δ-DNA复制中的调控机制，阐明了p12泛素化修饰在调控Pol δ-DNA损伤应对响应机制中的作用，对从人类癌症发病的起因揭示：由于Pol δ功能改变而使得遗传基因组不稳定，进而导致肿瘤发生的机制具有十分重要的科学意义。同时，拥有自主知识产权的人源Pol δ大规模制备和分离纯化平台的建立，也极大地解除了制约全世界科研工作者对人源Pol δ功能进行深入研究的瓶颈，即：获得大量、高纯度、具生物活性的Pol δ四亚基蛋白复合物。

项目成果

期刊论文数量（4）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
P50, the small subunit of DNA polymerase delta, is required for mediation of the interaction of polymerase delta subassemblies with PCNA.
P50 是 DNA 聚合酶 Delta 的小亚基，是介导聚合酶 Delta 亚组装体与 PCNA 相互作用所必需的
  • DOI：
    10.1371/journal.pone.0027092
  • 发表时间：
    2011
  • 期刊：
    PloS one
  • 影响因子：
    3.7
  • 作者：
    Wang Y;Zhang Q;Chen H;Li X;Mai W;Chen K;Zhang S;Lee EY;Lee MY;Zhou Y
  • 通讯作者：
    Zhou Y
人源DNA聚合酶Pol 小亚基p12的抗体制备及应用
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    中国生物工程杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    李骁;刘留;张磊;周亚竟
  • 通讯作者：
    周亚竟
Preparation of immunoaffinity column for rapid purification of human DNA polymerase delta and its subassemblies
快速纯化人DNA聚合酶δ及其亚组件的免疫亲和柱的制备
  • DOI：
    10.5897/ajb11.4272
  • 发表时间：
    2012-04
  • 期刊：
    African Journal of Biotechnology
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    Xiao Li;Keping Chen;Yajing Zhou;Huiqing Chen;Lei Zhang;Liu Liu;Yujue Wang;Qian Zhang;Xiaoyong Liu;Yuanqing He;Yan Chen
  • 通讯作者：
    Yan Chen
Production of recombinant human DNA polymerase delta in a Bombyx mori bioreactor.
家蚕生物反应器中重组人 DNA 聚合酶 Delta 的生产
  • DOI：
    10.1371/journal.pone.0022224
  • 发表时间：
    2011
  • 期刊：
    PloS one
  • 影响因子：
    3.7
  • 作者：
    Zhou Y;Chen H;Li X;Wang Y;Chen K;Zhang S;Meng X;Lee EY;Lee MY
  • 通讯作者：
    Lee MY

数据更新时间：{{ journalArticles.updateTime }}

{{ item.title }}
{{ item.translation_title }}
  • DOI：
    {{ item.doi || "--"}}
  • 发表时间：
    {{ item.publish_year || "--" }}
  • 期刊：
    {{ item.journal_name }}
  • 影响因子：
    {{ item.factor || "--"}}
  • 作者：
    {{ item.authors }}
  • 通讯作者：
    {{ item.author }}

数据更新时间：{{ journalArticles.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者：
    {{ item.authors }}

数据更新时间：{{ monograph.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者：
    {{ item.authors }}

数据更新时间：{{ sciAawards.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者：
    {{ item.authors }}

数据更新时间：{{ conferencePapers.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者：
    {{ item.authors }}

数据更新时间：{{ patent.updateTime }}

其他文献

人源DNA聚合酶δ研究进展
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    生物学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    张磊;陈慧卿;周亚竟
  • 通讯作者：
    周亚竟

其他文献

{{ item.title }}
{{ item.translation_title }}
  • DOI：
    {{ item.doi || "--" }}
  • 发表时间：
    {{ item.publish_year || "--"}}
  • 期刊：
    {{ item.journal_name }}
  • 影响因子：
    {{ item.factor || "--" }}
  • 作者：
    {{ item.authors }}
  • 通讯作者：
    {{ item.author }}
empty
内容获取失败，请点击重试
重试联系客服
title开始分析
查看分析示例
此项目为已结题，我已根据课题信息分析并撰写以下内容，帮您拓宽课题思路：

AI项目思路

AI技术路线图

周亚竟的其他基金

人DNA聚合酶δ第四亚基p12依赖泛素化修饰的下调机制分析
  • 批准号：
    31370790
  • 批准年份：
    2013
  • 资助金额：
    80.0 万元
  • 项目类别：
    面上项目

相似国自然基金

{{ item.name }}
  • 批准号：
    {{ item.ratify_no }}
  • 批准年份：
    {{ item.approval_year }}
  • 资助金额：
    {{ item.support_num }}
  • 项目类别：
    {{ item.project_type }}

相似海外基金

{{ item.name }}
{{ item.translate_name }}
  • 批准号：
    {{ item.ratify_no }}
  • 财政年份：
    {{ item.approval_year }}
  • 资助金额：
    {{ item.support_num }}
  • 项目类别：
    {{ item.project_type }}
{{ showInfoDetail.title }}

作者：{{ showInfoDetail.author }}

知道了

AI项目解读示例

课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
关闭
close
客服二维码