固定化功能蛋白质取向及构象表征和调控色谱新方法

结题报告
项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    21005060
  • 项目类别：
    青年科学基金项目
  • 资助金额：
    19.0万
  • 负责人：
    赵新锋
  • 依托单位：
    西北大学
  • 学科分类：
    B0401.分离与分析
  • 结题年份：
    2013
  • 批准年份：
    2010
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2011-01-01 至2013-12-31
  • 项目参与者：
    郑晓晖； 南叶飞； 何媛； 肖超妮； 李易非； 鲁海燕； 申旭霁； 杨晴来； 王宏飞；
  • 关键词：
    蛋白质固定化构象取向调控

项目摘要

针对固定化蛋白质色谱固定相表面蛋白质分子取向及构象尚不清楚的问题，以G-蛋白偶联受体超家族成员Beta2-肾上腺素受体（Beta2-AR）为例，以能分别特异性结合Beta2-AR全长基因、N末端和C末端结构域的3种免疫抗体为该受体的构象探针，利用其与受体结合强度与受体构象变化定量相关的特性，用前沿分析法研究离子强度、温度和pH等因素对3种抗体在Beta2-AR色谱固定相上容量因子、结合常数和热力学参数的影响，获得其与受体构象变化的定量关系，建立固定化受体取向及构象表征色谱新方法。在此基础上，以沙丁胺醇等6种配体为工具药，研究配体对固定化受体与抗体结合强度的影响及其浓度依赖关系，建立固定化受体取向及构象梳理和调控策略及方法，为功能蛋白质取向及构象的调控研究奠定基础，对以固定化功能蛋白质为核心的药物与蛋白质相互作用及药物活性成分筛选新方法具有理论意义。

结项摘要

本研究以G-蛋白偶联受体超家族成员Beta2-肾上腺素受体（Beta2-AR）为例，建立了基于重氮盐反应的His标签重组Beta2-AR定向固定化方法。该方法可推广至其他His标签融合蛋白质的定向固定化。项目组还引入了绿色荧光蛋白（GFP），建立了蛋白质固定化工艺及表面形态表征方法，解决了固定化功能蛋白质表面形态表征难的问题。进一步采用重氮盐方法制备了定向固定化Beta2-AR色谱固定相，建立了固定化Beta2-AR亲和色谱方法。针对经典亲和色谱中前沿分析和竞争置换分析方法的不足，推导获得了测定药物-蛋白质和蛋白质-蛋白质相互作用的理论公式。该理论以进样量和溶质的容量因子为变量，克服了前沿分析和竞争置换分析法配体用量大和分析时间长等不足。分别采用竞争置换法和项目所得理论公式对GFP抗体与固定化GFP，三种Beta2-AR抗体与固定化Beta2-AR的相互作用，证明直接进样法所得结合常数更接近文献免疫共沉淀方法的结果。本研究还发现作用于Beta2-AR全长基因的抗体在固定化Beta2-AR色谱固定相上的保留弱于作用于N末端和C末端结构域的抗体。三种抗体中，作用于N-末端结构域的抗体在固定化Beta2-AR色谱柱上的保留最强。上述研究表明，抗体可作为构象探针，定性表征固定化功能蛋白质的构象。项目组以作用于N末端结构域的抗体为构象探针，研究了温度、离子强度和流动相pH对抗体与固定化Beta2-AR结合常数的影响，发现温度对其影响较大。最后，以麻黄碱和伪麻黄碱的混合溶液为进样溶质，分别以添加有不同浓度麻黄碱和伪麻黄碱的磷酸盐缓冲溶液为流动相，研究了不同温度及配体添加浓度对麻黄碱和伪麻黄碱在固定化Beta2-AR色谱柱上分离度的影响，证明配体和温度为影响固定化受体构象的关键因素，可用于建立固定化功能蛋白质构象调控方法。综上，本研究解决了固定化功能蛋白质构象无表征和调控方法的问题，对于以固定化蛋白质为核心的生物传感器、亲和色谱及酶联免疫试剂盒的研究具有重要意义，有望促进分析化学相关学科的发展。本项目共发表科研论文12篇，其中SCI收录7篇，研究成果被Drug Discovery Today （IF=6.890）编辑Hubertus Irth和Journal of Chromatography B（IF2.888）主编David S. Hage分别进行了重要评述。

项目成果

期刊论文数量（9）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（3）
专利数量（0）
Revealing interaction between sulfobutylether--cyclodextrin and reserpine by chemiluminescence and site-directed molecular docking
揭示磺丁基醚之间的相互作用
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    Luminescence
  • 影响因子：
    2.9
  • 作者：
    Xiong Xunyu;Wu Min;Zhao Xinfeng;Song Zhenghua
  • 通讯作者：
    Song Zhenghua
Revealing binding interaction between seven drugs and immobilized b2-adrenoceptor by high-performance affinity chromatography using frontal analysis
使用前沿分析通过高效亲和层析揭示七种药物与固定化 β2 肾上腺素受体之间的结合相互作用
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    Journal of Molecular Recognition
  • 影响因子：
    2.7
  • 作者：
    Zhao Xinfeng;Huang Jingjing;Li Qian;Wei Lusha;Zheng Jianbin;Zheng Xiaohui;Li Zijian;Zhang Youyi
  • 通讯作者：
    Zhang Youyi
Effects of temperature and mobile phase composition on the interaction between berberine and immobilized 2-adrenocetor by high performance affinity chromatography
温度和流动相组成对小檗碱与固定化物相互作用的影响
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    Zhao xinfeng;Li Qian;Huang Jingjing;Zheng Jianbin;Zheng Xiaohui;Li Zijian;Zhang Youyi
  • 通讯作者：
    Zhang Youyi
Binding Interaction Between Prazosin and Immobilized Receptor by Frontal Analysis
通过正面分析哌唑嗪和固定化受体之间的结合相互作用
  • DOI：
    10.1007/s10337-012-2198-4
  • 发表时间：
    2012-02
  • 期刊：
    Chromatographia
  • 影响因子：
    1.7
  • 作者：
    Zhao, Xinfeng;Lu, Haiyan;Huang, Jing;Zheng, Jianbin;Zheng, Xiaohui;Zhang, Youyi
  • 通讯作者：
    Zhang, Youyi
HPLC-ESI-TOF-MS法优选麻黄中麻黄碱的提取工艺
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    西北药学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    李倩;廖予菲;杨洋;郑晓晖;王世祥;赵新锋
  • 通讯作者：
    赵新锋

数据更新时间：{{ journalArticles.updateTime }}

{{ item.title }}
{{ item.translation_title }}
  • DOI：
    {{ item.doi || "--"}}
  • 发表时间：
    {{ item.publish_year || "--" }}
  • 期刊：
    {{ item.journal_name }}
  • 影响因子：
    {{ item.factor || "--"}}
  • 作者：
    {{ item.authors }}
  • 通讯作者：
    {{ item.author }}

数据更新时间：{{ journalArticles.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者：
    {{ item.authors }}

数据更新时间：{{ monograph.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者：
    {{ item.authors }}

数据更新时间：{{ sciAawards.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者：
    {{ item.authors }}

数据更新时间：{{ conferencePapers.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者：
    {{ item.authors }}

数据更新时间：{{ patent.updateTime }}

其他文献

用α_(1A)-肾上腺素受体色谱研究哌嗪类化合物的生物亲和作用
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    第二军医大学学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    赵新锋;杨晴来;左正龙;王宏飞;郑晓晖;申旭霁
  • 通讯作者：
    申旭霁
受体色谱:中药靶向活性成分高效筛选技术
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2018
  • 期刊：
    世界科学技术-中医药现代化
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    刘嘉君;贾晓妮;王静;曾凯竹;李倩;赵新锋
  • 通讯作者：
    赵新锋
单酰化哌嗪类化合物的合成
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    合成化学
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    左正龙;杨晴来;郑晓晖;申旭霁;王宏飞;赵新锋
  • 通讯作者：
    赵新锋
_2-肾上腺素受体生物色谱在中药活性成分筛选中的应用
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    分析化学
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    赵新锋;卫引茂;何媛;郑晓晖
  • 通讯作者：
    郑晓晖
2013—2016年珠海地区臭氧浓度特征及其与气象因素的关系
  • DOI：
    10.13671/j.hjkxxb.2018.0390
  • 发表时间：
    2019
  • 期刊：
    环境科学学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    周学思;廖志恒;王萌;陈静林;董娟;赵新锋;范绍佳
  • 通讯作者：
    范绍佳

其他文献

{{ item.title }}
{{ item.translation_title }}
  • DOI：
    {{ item.doi || "--" }}
  • 发表时间：
    {{ item.publish_year || "--"}}
  • 期刊：
    {{ item.journal_name }}
  • 影响因子：
    {{ item.factor || "--" }}
  • 作者：
    {{ item.authors }}
  • 通讯作者：
    {{ item.author }}
empty
内容获取失败，请点击重试
重试联系客服
title开始分析
查看分析示例
此项目为已结题，我已根据课题信息分析并撰写以下内容，帮您拓宽课题思路：

AI项目思路

AI技术路线图

赵新锋的其他基金

基于亲和导向-邻近反应的复杂体系天然蛋白固定新方法及色谱评价
  • 批准号：
    22374116
  • 批准年份：
    2023
  • 资助金额：
    50 万元
  • 项目类别：
    面上项目
别构响应型受体色谱方法建立及评价
  • 批准号：
    21974107
  • 批准年份：
    2019
  • 资助金额：
    63 万元
  • 项目类别：
    面上项目
基于G-蛋白偶联受体信号转导通路的复杂体系药物活性成分色谱筛选方法
  • 批准号：
    21775119
  • 批准年份：
    2017
  • 资助金额：
    65.0 万元
  • 项目类别：
    面上项目
固定化O6-烷基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶标签重组蛋白构象表征新方法的建立及应用
  • 批准号：
    21475103
  • 批准年份：
    2014
  • 资助金额：
    45.0 万元
  • 项目类别：
    面上项目

相似国自然基金

{{ item.name }}
  • 批准号：
    {{ item.ratify_no }}
  • 批准年份：
    {{ item.approval_year }}
  • 资助金额：
    {{ item.support_num }}
  • 项目类别：
    {{ item.project_type }}

相似海外基金

{{ item.name }}
{{ item.translate_name }}
  • 批准号：
    {{ item.ratify_no }}
  • 财政年份：
    {{ item.approval_year }}
  • 资助金额：
    {{ item.support_num }}
  • 项目类别：
    {{ item.project_type }}
{{ showInfoDetail.title }}

作者：{{ showInfoDetail.author }}

知道了

AI项目解读示例

课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
关闭
close
客服二维码