蛋白修饰影响嗜水气单胞菌耐药功能及其作用机理研究

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项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号:
    31670129
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    67.0万
  • 负责人:
  • 依托单位:
  • 学科分类:
    C0108.病原细菌学
  • 结题年份:
    2020
  • 批准年份:
    2016
  • 项目状态:
    已结题
  • 起止时间:
    2017-01-01 至2020-12-31

项目摘要

The protein post-translational modifications (PTMs) play important role on the bacterial antibiotics resistance. Recently, researches including our team found that many antibiotics resistance functional proteins were modified by common PTMs. However, mechanism and effects of these PTMs on bacterial antibiotics resistance are still largely unknown..In this study, to further investigate the antibiotic resistance mechanism meditated by PTMs, quantitative proteomics would be used to compare the differential expression of common PTMs, such as phosphorylation, succinylation and acetylation in antibiotics resistance Aeromonas hydrophila strains firstly; Secondly, the antibiotics resistance functions or enzymatic activities of these candidate proteins will be valued by antibiotics survival capabilities assay in related strains which genes are knocked out, rescued or site-directed mutated; Finally, to illuminate the intrinsic roles of protein-protein interaction of these PTMs in antibiotics resistance, PTMs mediated complexes would be identified by molecular biology techniques such as co-immunoprecipitation and pull down method in over-expressed and site-directed mutated strains. In this way, we try to provide novel insights into mechanisms of antibiotics resistance which mediated by common PTMs and provide novel candidate targets for new drug development.
蛋白质翻译后修饰(PTMs)在细菌耐药中起重要的作用。申请人及前人研究发现细菌中多个耐药相关蛋白具有蛋白修饰位点,但其对耐药功能的影响及作用机理尚不明确。本课题在前期研究的基础上,拟利用定量蛋白修饰组学技术,比较不同嗜水气单胞菌耐药菌株中,磷酸化、乙酰化和琥珀酰化等常见PTMs蛋白与位点的表达差异,初步了解蛋白修饰在细菌耐药中的变化;将关键差异基因缺失、补救及修饰位点突变后,进行耐药功能与相关酶活性评价,验证关键蛋白及相应修饰位点的耐药功能;利用Pull-down与免疫共沉淀等方法,比较关键修饰位点突变后对目标蛋白复合物组成的影响,明确耐药相关PTMs在蛋白相互作用中的功能。研究结果将有助于深化对蛋白质修饰介导耐药机制的认识,并为新药开发提供候选靶点。

结项摘要

水产养殖业重要的病原菌嗜水气单胞菌的耐药性日益严峻,蛋白质翻译后修饰(PTMs)在细菌耐药中起重要的作用,但其对耐药功能的影响及作用机理尚不明确。本项目首先利用特异抗体富集结合质谱鉴定的修饰蛋白质组学技术,构建嗜水气单胞菌乙酰化和琥珀酰化等常见PTMs蛋白修饰图谱,并以群体感应中重要的II型信号分子合成酶LuxS蛋白乙酰化和琥珀酰化修饰为例,发现LuxS蛋白K23和K30位点的琥珀酰化修饰正调控LuxS的酶活性,K156位点的乙酰化和琥珀酰化修饰分别负、正调LuxS酶活性,产生Cross-talk现象,从而调控细菌的群体感应,进而影响到细菌的耐药性。进而利用Label-free定量修饰蛋白质组学技术,比较不同嗜水气单胞菌耐药菌株中全蛋白与酰基化的修饰蛋白与位点的表达差异。生物信息学分析发现,修饰蛋白多参与蛋白核糖体翻译、TCA循环、丙酮酸代谢等生物途径;然后以LuxS、AHA_0655、LamB和铁离子吸收蛋白Fur为例,探讨其酰基化修饰对细菌耐药的影响。首先,研究发现LuxS蛋白K23与K165位点的酰基化改变了细菌对土霉素的敏感性,同时还发现Arginine ABC transporter(AHA_0655) K14和麦芽糖通道蛋白LamB K51位点影响细菌的耐药性提示酰基化修饰这些蛋白影响应对细菌耐药过程;其次,Δfur菌株导致细菌对大部分抗生素的耐药性降低,但对链霉素、硫酸新霉素和巴龙霉素的抗性增加;再次,当Fur蛋白K14突变为E时,细菌对喹诺酮类抗生素的耐药性普遍下降,特别是对恩诺沙星和巴洛沙星的最低杀菌浓度下降8倍。以上结果初步证实乙酰化/琥珀酰化修饰在细菌Fur蛋白的耐药调控功能中起重要的作用,Fur蛋白可能只需要通过改变K14位点的不同酰基化修饰来调控耐药相关基因的表达,从而应对不同类型抗生素压力。这一发现解释了有些重要转录因子的mRNA或者蛋白质水平并没有变化,却依旧可以调控目的基因表达的现象,充分体现了细菌耐药的复杂性,可能是一种新的耐药调控机制。以上研究结果将有助于深化对蛋白质修饰介导耐药机制的认识,并为新药开发提供候选靶点。

项目成果

期刊论文数量(30)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(3)
SWATH based quantitative proteomics analysis reveals Hfq2 play an important role on pleiotropic physiological functions in Aeromonas hydrophila
基于SWATH的定量蛋白质组学分析揭示Hfq2在嗜水气单胞菌的多效生理功能中发挥重要作用。
  • DOI:
    10.1016/j.jprot.2018.12.030
  • 发表时间:
    2019-03-20
  • 期刊:
    JOURNAL OF PROTEOMICS
  • 影响因子:
    3.3
  • 作者:
    Cai, Qilan;Wang, Guibin;Lin, Xiangmin
  • 通讯作者:
    Lin, Xiangmin
Anti-quorum Sensing and Protective Efficacies of Naringin Against Aeromonas hydrophila Infection in Danio rerio.
柚皮苷对斑马鱼嗜水气单胞菌感染的抗群体感应和保护作用
  • DOI:
    10.3389/fmicb.2020.600622
  • 发表时间:
    2020
  • 期刊:
    Frontiers in microbiology
  • 影响因子:
    5.2
  • 作者:
    Srinivasan R;Devi KR;Santhakumari S;Kannappan A;Chen X;Ravi AV;Lin X
  • 通讯作者:
    Lin X
The LysR-Type Transcriptional Regulator YeeY Plays Important Roles in the Regulatory of Furazolidone Resistance in Aeromonas hydrophila.
LysR 型转录调节因子 YeeY 在调节嗜水气单胞菌的呋喃唑酮耐药性中发挥着重要作用。
  • DOI:
    10.3389/fmicb.2020.577376
  • 发表时间:
    2020
  • 期刊:
    Frontiers in microbiology
  • 影响因子:
    5.2
  • 作者:
    Fu Y;Zhang L;Wang G;Lin Y;Ramanathan S;Yang G;Lin W;Lin X
  • 通讯作者:
    Lin X
Comparative Extracellular Proteomics of Aeromonas hydrophila Reveals Iron-Regulated Secreted Proteins as Potential Vaccine Candidates
嗜水气单胞菌的比较细胞外蛋白质组学揭示铁调节分泌蛋白作为潜在的疫苗候选者
  • DOI:
    10.3389/fimmu.2019.00256
  • 发表时间:
    2019-02-18
  • 期刊:
    FRONTIERS IN IMMUNOLOGY
  • 影响因子:
    7.3
  • 作者:
    Wang, Yuqian;Wang, Xiaoyun;Lin, Xiangmin
  • 通讯作者:
    Lin, Xiangmin
The characteristics of antibiotic resistance and phenotypes in 29 outer-membrane protein mutant strains in Aeromonas hydrophila
29株嗜水气单胞菌外膜蛋白突变株的耐药性及表型特征
  • DOI:
    10.1111/1462-2920.14761
  • 发表时间:
    2019-08-15
  • 期刊:
    ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY
  • 影响因子:
    5.1
  • 作者:
    Li, Zeqi;Wang, Yuqian;Lin, Xiangmin
  • 通讯作者:
    Lin, Xiangmin

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其他文献

革兰氏阴性细菌外膜蛋白耐药功能及其抑菌策略研究进展
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    2015
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  • 作者:
    李碗芯;孙莉娜;林向民
  • 通讯作者:
    林向民
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  • DOI:
    --
  • 发表时间:
    --
  • 期刊:
    基因组学与应用生物学
  • 影响因子:
    --
  • 作者:
    李婉芯;胡文杰;林玲;林向民
  • 通讯作者:
    林向民
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  • 发表时间:
    2017
  • 期刊:
    福建农业学报
  • 影响因子:
    --
  • 作者:
    胡文杰;张香玉;吴倩;林梅贵;黄小芳;林向民
  • 通讯作者:
    林向民
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    2014-02
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    吴林坤;林向民;林文雄
  • 通讯作者:
    林文雄
嗜水气单胞菌中转录因子 AHA_1581 对细菌生理功能调控机制的研究
  • DOI:
    10.13343/j.cnki.wsxb.20210083
  • 发表时间:
    2021
  • 期刊:
    微生物学报
  • 影响因子:
    --
  • 作者:
    李碗芯;赵怡扬;林玲;林向民
  • 通讯作者:
    林向民

其他文献

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林向民的其他基金

新型细菌去乙酰化酶AhCobQ的底物鉴定及其调控机制研究
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致病性嗜水气单胞菌在生物膜状态下的耐药机制研究
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AI项目解读示例

课题项目:调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要:

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题,其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子,其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而,TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用,影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法,探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用,为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义,并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路:

科学问题:TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达?
前期研究:已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应,但其具体机制尚不明确。
研究创新点:本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线:包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术:TRIM2与病毒RNA的相互作用分析,IFN-β启动子活性检测。
实验模型:使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
      
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