抗HCV包膜蛋白E1/E2高中和活性单链抗体的筛选及抗病毒效果评价

结题报告
项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    31570933
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    25.0万
  • 负责人：
    韦三华
  • 依托单位：
    中国人民解放军第四军医大学
  • 学科分类：
    C0808.疫苗、抗体与免疫干预
  • 结题年份：
    2017
  • 批准年份：
    2015
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2016-01-01 至2017-12-31

项目摘要

Hepatitis C virus (HCV) infection is one of the leading causes of chronic liver disease, which is associated with a high risk of cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Currently there was no available vaccine to prevent HCV infection. The standard therapy for chronic infection with pregylated alpha interferon (IFN-α) and ribavirin is only effective in 40%-60% of cases. Although new effective HCV antiviral regimens which were approved recently can cure the vast majority of patients, but too expensive. In former study, HCVpp and HCVcc have been obtained and Single Chain Fragment Variable (ScFv) gene has been screened from HCV NS5B with ribosome display technology. We will investigated the humor immune responses in HCV patients by neutralization assay with HCVpp. PBMC from patients with higher titers neutralization antibodies will be isolated, VH and VL gene will be amplified by PCR from the cDNA library inverse transcription from total RNA of PBMC. ScFv gene library of HCV E1/E2 will be obtained by ribosome display technology. The ScFv gene will be identified and expressed in coli. After obtaining ScFv protein, the ScFv inhibitory activity to HCVpp infected Huh-7.5 cells will be analyzed. And HCVcc replication in Huh7.5 will be determined after treating with the ScFv. These study would be provided new strategy and reliable experiment results for development of HCV antibody medicine.
丙型肝炎病毒（HCV）感染严重威胁人类健康，极易慢性化和发展为肝硬化及肝癌，迄今疫苗研究进展缓慢。重组干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗效果不尽人意，新型蛋白酶抑制剂显示较好的疗效，但价格昂贵，迫切需要研制更加经济和安全有效的新型抗病毒药物。本研究在建立HCVpp、HCVcc系统及利用核糖体展示库技术筛选抗HCV NS5B蛋白单链抗体（ScFv）工作基础上，通过HCVpp测定中和抗体，选择持续产生高中和抗体滴度的HCV患者，分离其PBMC，扩增全套重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）的基因，构建抗包膜蛋白的核糖体展示的ScFv基因库，筛选针对包膜蛋白E1/E2的ScFv；对所筛选到的ScFv进行表达和鉴定；观察抗E1/E2的ScFv对HCVpp感染HuH-7.5细胞的阻断作用，以及对HCVcc复制的抑制作用。该研究结果可为研发具有高中和活性的新型HCV抗体药物提供可靠的实验依据。

结项摘要

丙型肝炎病毒（HCV）感染后极易慢性化和发展为肝硬化及肝癌，迄今尚无预防疫苗。重组干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗效果不尽人意，DAA药物显示较好的疗效，但价格昂贵，迫切需要研制更加经济和安全有效的新型抗病毒药物。本课题利用核糖体展示库技术，通过HCVpp测定中和抗体，选择持续产生高中和抗体滴度的HCV患者，分离其PBMC，扩增全套重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）的基因，构建抗包膜蛋白的核糖体展示的ScFv基因库，筛选针对包膜蛋白E2核心区的ScFv；筛选到抗包膜蛋白的的ScFv，对ScFv进行表达和鉴定；并观察抗E1/E2的ScFv对HCVpp感染HuH-7.5细胞的阻断作用，以及对HCVcc复制的抑制作用。结果筛选到的ScFv能有效抑制HCVpp和HCVcc感染HuH-7.5。该研究结果可为研发具有高中和活性的新型HCV抗体药物提供可靠的实验依据。课题已发表相关论文，正准备申请专利。

项目成果

期刊论文数量（5）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
嵌合HCV串联多表位的乙肝S基因真核载体构建及表达
  • DOI：
    10.16519/j.cnki.1004-311x.2016.01.003
  • 发表时间：
    2016
  • 期刊：
    生物技术
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    王晓岩;雷迎峰;李翠;林芳;崔颖;舒放;张惠中;韦三华
  • 通讯作者：
    韦三华
HCV多中和抗原表位嵌合病毒样颗粒免疫获得血清内中和抗体评价
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2017
  • 期刊：
    中国免疫学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    王晓岩;张海;雷迎峰;林芳;崔颖;李斌;张惠中;韦三华
  • 通讯作者：
    韦三华
嵌合有HCV多中和抗原表位的乙肝S抗原病毒样颗粒的制备与鉴定
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2017
  • 期刊：
    现代免疫学
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    王晓岩;张海;雷迎峰;林芳;崔颖;李斌;舒放;张惠中;韦三华
  • 通讯作者：
    韦三华
Anti-proliferation of breast cancer cells with itraconazole: Hedgehog pathway inhibition induces apoptosis and autophagic cell death
伊曲康唑抗乳腺癌细胞增殖：Hedgehog通路抑制诱导细胞凋亡和自噬性细胞死亡
  • DOI：
    10.1016/j.canlet.2016.10.034
  • 发表时间：
    2017-01-28
  • 期刊：
    CANCER LETTERS
  • 影响因子：
    9.7
  • 作者：
    Wang, Xiaoya;Wei, Sanhua;Zhang, Hai
  • 通讯作者：
    Zhang, Hai

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其他文献

HCV复合多表位基因真核表达载体
  • DOI：
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  • 发表时间：
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  • 期刊：
    标注国家自然科学基金项目（30371280)
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    韦三华;尹文;雷迎峰
  • 通讯作者：
    雷迎峰
HCV HLA-A2限制性复合多表位基因重组腺病毒的包装、筛选及鉴定
  • DOI：
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  • 发表时间：
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  • 期刊：
    临床肝胆病杂志
  • 影响因子：
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  • 作者：
    韦三华
  • 通讯作者：
    韦三华
HCV复合多表位抗原基因的克隆表
  • DOI：
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  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    标注国家自然科学基金项目（30371280)
  • 影响因子：
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  • 作者：
    韦三华;尹文;胡兴斌
  • 通讯作者：
    胡兴斌
HCV中和抗原表位与HBV S抗原嵌合病毒样颗粒的制备及纯化
  • DOI：
    10.13200/j.cnki.cjb.000823
  • 发表时间：
    2015
  • 期刊：
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  • 作者：
    舒放;王晓岩;雷迎峰;林芳;王希;李斌;刘冲;张惠中;韦三华
  • 通讯作者：
    韦三华
小鼠对表达HBV截短肽的耻垢分枝菌的免疫应答
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    微生物学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    胡兴斌;尹文;雷迎峰;韦三华
  • 通讯作者：
    韦三华

其他文献

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韦三华的其他基金

乙肝S抗原为载体的HCV嵌合病毒样颗粒预防疫苗的初步实验研究
  • 批准号：
    31370924
  • 批准年份：
    2013
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    80.0 万元
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    面上项目
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  • 批准号：
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  • 批准年份：
    2010
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    面上项目
HCV A2限制性CTL表位疫苗诱导的特异性细胞免疫应答及保护评价
  • 批准号：
    30700760
  • 批准年份：
    2007
  • 资助金额：
    17.0 万元
  • 项目类别：
    青年科学基金项目

相似国自然基金

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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