HOTAIR通过下调miR-502调控TRAF2与TRAF4相互作用影响乳腺癌干细胞生物学行为的机制

Our previous research showed that HOTAIR was high expression in breast cancer tissues and stem cells(BCSC),while the expression of miR-502 was low ; TRAF2 was high expression in breast cancer and it could bind TRAF4 ,then regulating the cytoplasmic/nuclear distribution of TARF4;we found that there are binding sites between HOTAIR and miR-502,miR-502 and TRAF2 3’UTR by bioinformatics software. We consumed that HOTAIR was high expression in BCSC, while miR-502 was low expression.HOTAIR bound miR-502 and weakened its negative regulation on TRAF2, which influenced the interaction between TRAF2 and TRAF4 and the biological behavior of BCSC. In this study, firstly we want to identify that HOTAIR bind miR-502 and negatively regulate miR-502, which influence the biological behavior of BCSC. Secondly, we will investigate the interaction between miR-502 and TRAF2. Then we will identify that miR-502 could influence the interaction between TRAF2 and TRAF4 through its regulatory effect on TRAF2. At last we will construct breast cancer stem cells transfected with pSilence-2.1-HOTAIR, which overexpressed miR-502 or not. The cells will be cultured in vitro and then be transplanted to nude mice to identify the moderating effect on the interaction of TRAF2 and TRAF4 and to the biological behaviour of breast cancer stem cells.

前期发现，乳腺癌组织和乳腺癌干细胞(BCSC)中HOTAIR高表达，miR-502低表达；乳腺癌中TRAF2高表达，并与TRAF4结合影响TRAF4核浆分布；软件预测到HOTAIR与miR-502、miR-502与TRAF2 3’UTR间有结合位点。推测BCSC中HOTAIR高表达，miR-502低表达，HOTAIR结合miR-502并减弱其对TRAF2的负性调控，影响TRAF2与TRAF4互作以及BCSC的生物学行为。我们拟先验证HOTAIR与miR-502结合，负性调控miR-502影响BCSC生物学行为的机制；进一步研究miR-502与TRAF2结合作用；明确miR-502通过TRAF2影响TRAF2与TRAF4互作，进而影响BCSC生物学行为的机制。最后在BCSC裸鼠移植瘤模型中研究HOTAIR抑制剂与miR-502单独或联合应用对TRAF2和TRAF4基因功能的调控作用及抑瘤效应

肿瘤干细胞与正常干细胞一样,具有不可控制的繁殖能力和不断自我更新完善的能力,在肿瘤的发生、复发以及转移中起到一定的作用。大量研究表明长链非编码RNA（lncRNA）在包括乳腺癌在内的多种疾病中起着至关重要的作用。为了解决乳腺癌的化疗耐药性和复发性，我们旨在找出可以用于早期诊断和治疗的新型分子机制。HOTAIR(即Hox转录反义RNA)在Hox的基因中固然存在, 先前已被确定为一个能够预测转移和死亡的因子。在我们的研究中，与人乳腺癌癌旁正常组织、正常乳腺上皮细胞系MCF-10A相比，人乳腺癌组织，BCSC和乳腺癌细胞系MCF-7，MDA-MB-231，T47D和BT-549中的HOTAIR水平升高，同时miR-502-5p的表达降低，TRAF2水平升高。生物学行为实验表明，下调HOTAIR可显著抑制BCSC和乳腺癌细胞系的增值和迁移，这表明HOTAIR在乳腺癌中发挥了致癌作用。生物信息学分析表明，HOTAIR能够与miR-502-5p靶向结合，这是一种在癌症中至关重要的肿瘤抑制因子。我们验证了miR-502-5p能够抑制乳腺癌的生物学行为。 实时定量聚合酶链反应数据显示，HOTAIR siRNA增加了miR-502-5p的表达。 另外，TRAF2被鉴定为miR-502-5p的下游靶蛋白。我们的研究表明，HOTAIR通过作为竞争性内源RNA调控miR-502-5p介导的TRAF2的上调，从而影响乳腺癌的进展。总体来说，我们的研究表明，HOTAIR / miR-502-5p / TRAF2轴是一个新的研究靶标，可以为乳腺癌干细胞发育的分子机制提供新的见解。

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