基于多靶点和脑部转运的“抑肝散”抗老年痴呆效应物质及配伍机理的研究

Alzheimer's disease (AD) is a central nervous system degenerative disease caused by multiple etiologies, the treatments focused on a single target failed to obtain satisfactory curative effects. It has been recently reported that the traditional Chinese medicine Yi-gan San was safe and bene?cial in treating AD clinically. This project fixes the attention on the composition of the different chemical groups of Yi-gan San crossing the blood-brain barrier in vivo and in vitro to establish a method for the rapid identification of the active components. The different pathogenic key targets(AChE, PRAP-1,BACE-1 and Caspase-3) are screening by the cells and the whole animal models for these components to clarify the active compounds and multi-target effects for cholinergic regulation and neuron protective effects of Yi-gan San. Furthermore, the brain transport mechanisms and interaction of main active ingredients of Ramulus Uncariae cum Uncis, Radix Glycyrrhizae and Rhizoma Chuanxiong will be studied by MDCKII-MDR1 cells to reveal the compatibility mechanism of Yi-gan San.

老年痴呆（AD）系多病因的中枢神经系统退行性疾病，针对单一靶点的治疗未能取得满意的疗效。中药复方抑肝散用于AD临床治疗效果显著。本项目从抑肝散不同化学物质类群体内外跨血脑屏障的成分入手，基于现代分析技术建立复杂体系多组分的快速识别与同时定量表征的方法体系，采用细胞和整体动物模型，基于AD不同致病环节的关键靶点（AChE、PRAP-1、BACE-1和Caspase-3）追踪抑肝散具胆碱功能调节与神经元保护作用的活性成分，揭示抑肝散多靶点阻抑AD的效应物质；并且采用稳定过度表达转运蛋白的细胞系，阐明活性成分的脑转运机制和相互作用，从活性成分透过血脑屏障的视角揭示抑肝散的配伍机理。本研究围绕表征方剂复杂物质、多靶点生物活性评价、分析入脑机制三个相互衔接的关健环节，从分子水平阐明抑肝散阻抑脑神经损伤级联反应的效应物质和转运机制，为复方配伍的基础研究和脑源性疾病的多靶点治疗提供理论依据。

抑肝散(YGS)为传统治疗阿尔兹海默症(AD)的复方制剂。本项目筛选了YGS具有AD治疗作用的有效部位；研究和比较有效部位在不同AD模型的多靶点作用机制，构建了中枢神经治疗药物脑部转运研究的技术平台。结果显示，YGS40部位具有较强的神经保护作用，对小鼠学习记忆障碍均有明显的改善。采用高效液相色谱串联高分辨质谱法鉴定了YGS的55种化学成分；在有效部位YGS40中共鉴定出了64个化合物，建立了YGS中11个特征组分含量测定方法。组方配伍研究显示，钩藤为YGS组方君药，与单味药材相比，全方特征组分含量均显著增加。作用机制研究结果显示，有效部位YGS40通过促进小鼠脑内抗氧化酶的表达和抑制乙酰胆碱酯酶活力，抑制神经元发生凋亡，发挥其神经保护作用。YGS40能够保护H2O2诱导的PC12细胞存活率降低及抑制胞内LDH的释放，增加细胞内抗氧化酶和CAT活力，抑制MDA水平，抑制胞内活性氧簇的生成、钙离子的增加、线粒体膜电位的降低，促使细胞Annexin V-FITC阳性率、PI阴性细胞率降低，凋亡蛋白cleaved-caspase-3和Bax水平减少、抗凋亡蛋白Bcl-2水平。采用LC-MS/MS方法研究了YGS在模型动物体内的靶组织分布及代谢特征。结果在模型小鼠脑中检出6种原型化合物，在尿液中鉴定了17种原型化合物，4种代谢产物。获得了大鼠血浆中5种主要成分的药动学参数。比较了主要药效成分钩藤碱和异钩藤碱在大鼠体内的立体选择性药代动力学过程，阐明影响其脑部吸收的关键因素。本项目的研究共发表了5篇SCI文章，累计影响因子10.4；申请并已授权专利1项；培养博士生2名，硕士生4名。构建的药物跨血脑屏障转运的体外研究平台，已应用于多种中药生物碱类药物药物的脑部外排研究。

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