噬菌体展示肽库筛选农药通用结构半抗原的肽模拟物及其在农药多残留免疫检测中的应用研究

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项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    30972050
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    33.0万
  • 负责人：
    杨正友
  • 依托单位：
    山东农业大学
  • 学科分类：
    C2008.食品质量与安全检测
  • 结题年份：
    2012
  • 批准年份：
    2009
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2010-01-01 至2012-12-31

项目摘要

目前免疫检测作为快速可靠的检测技术在农药单残留的检测上应用较多，而在农药多残留检测的运用上受到限制，困扰这一问题的关键是方法的检测谱窄、灵敏度不足。本项目引入分子设计理念，利用噬菌体展示肽库筛选技术，提出解决农药多残留免疫分析方法检测谱窄和灵敏度不足问题的新思路。研究采用量子化学和结构化学的理论和方法，从分子角度设计能最大程度突出和保留磷酸酯类和硫代磷酸酯类有机磷农药的两种不同的通用结构半抗原; 将它们偶联到相同的蛋白质上，优化并制备双簇农药通用结构人工抗原，在此基础上制备和筛选出"宽谱特异性识别"的高亲和力多抗；以纯化的多抗为配基，利用噬菌体展示肽库，筛选有机磷农药通用结构半抗原的肽模拟物，建立异源ELISA, 提高"灵敏度";比较异源ELISA与对照ELISA灵敏度差异。为进一步建立检测谱宽、灵敏度高的农药多残留异源ELISA快速检测方法提供科学依据。

结项摘要

目前免疫检测作为快速可靠的检测技术在农药单残留的检测上应用较多，而在农药多残留检测的运用上受到限制，困扰这一问题的关键是方法的检测谱窄、灵敏度不足。本项目引入分子设计理念，利用噬菌体展示肽库筛选技术，提出解决农药多残留免疫分析方法检测谱窄和灵敏度不足问题的新思路。首先，从分子设计的角度，设计合成和选取了代表芳香基二甲氧基硫代磷酸酯类有机磷农药、芳香基二乙氧基磷酸酯类有机磷农药、直链二甲氧基硫代磷酸酯类有机磷农药和直链二乙基磷酸酯类有机磷农药的4种通用结构半抗原PM、PO、PS和DPA，然后将它们两两偶联到相同的蛋白质上，优化并制备了4种双簇农药通用结构人工抗原，在此基础上制备和筛选出4种高亲和力多抗，间接竞争ELISA检测表明，制备的四种多克隆抗体都具有良好的宽谱特异性，特别是以双簇农药通用结构人工抗原PO-PS-BSA为免疫原制备的多抗PO-PS,能够识别常用的11种有机磷农药，并且检测限达到了纳克级。以纯化好的PO-PS多抗为配基，利用噬菌体展示肽库，筛选出了有机磷农药通用结构半抗原的肽模拟物30多种，并建立了竞争肽模拟物异源ELISA,结果显示，噬菌体的模拟肽物能够有效的与选定的常用的有机磷农药农药进行竞争，并且检测灵敏度都有明显的提高；因此筛选出来的噬菌体模拟肽物可作为有机磷农药的结构类似物，用于有机磷农药的多残留检测方法的建立。本研究结果为建立检测谱宽、灵敏度高的农药多残留异源ELISA 快速检测方法提供科学依据。

项目成果

期刊论文数量（1）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
Rapid Detection of Enterotoxigenic Clostridium perfringens in Meat Samples Using Immunomagnetic Separation Polymerase Chain Reaction (IMS-PCR)
使用免疫磁分离聚合酶链反应 (IMS-PCR) 快速检测肉样品中产肠毒素梭菌
  • DOI：
    10.1021/jf1009654
  • 发表时间：
    2010-06-23
  • 期刊：
    JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY
  • 影响因子：
    6.1
  • 作者：
    Yang, Zheng-You;Shim, Won-Bo;Chung, Duck-Hwa
  • 通讯作者：
    Chung, Duck-Hwa

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  • 发表时间：
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  • 通讯作者：
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  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    杨正友;彭涛
  • 通讯作者：
    彭涛

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

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          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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