牛分枝杆菌Erp蛋白突变体的构建及特性研究

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项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号:
    30960289
  • 项目类别:
    地区科学基金项目
  • 资助金额:
    24.0万
  • 负责人:
  • 依托单位:
  • 学科分类:
    C1803.兽医细菌及其他微生物学
  • 结题年份:
    2012
  • 批准年份:
    2009
  • 项目状态:
    已结题
  • 起止时间:
    2010-01-01 至2012-12-31

项目摘要

牛结核病(bovine tuberculosis)是由牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis,MTB)引起的一种牛的慢性消耗性传染病。牛结核病的发生不仅对宁夏地区、全国乃至世界范围内养牛业的生产力造成了不同程度的负面影响,更重要的是对人类健康构成了严重威胁。Erp(exported repeated protein)是一种MTB夹膜蛋白,其特性与功能尚未十分清楚。本研究拟构建MTB Erp基因N端缺失、C端缺失以及PGLTS重复序列缺失、增加的多个突变体,并将其分别转染至鼠单核巨噬细胞株,利用2-D电泳技术,对不同细胞株的蛋白进行检测,寻找差异蛋白,对差异点进行质谱分析,并利用实时荧光定量PCR等技术对差异蛋白进一步进行验证,以期为进一步阐明Erp的作用机制与功能研究提供理论依据,为牛结核病的诊断与防制奠定基础。

结项摘要

本研究克隆获得了BCG erp基因,构建了erp多个突变体及相应的表达载体。原核表达产物的Tricine/SDS-PAGE检测结果表明,目的蛋白成功实现表达;生物信息学分析及Western blotting检测均表明重组蛋白ERP Mut C4、Mut N8和Mut CN4/8不能被ERP抗血清识别,表明ERP的基序数量、N端及C端均对其免疫原性有重要影响。真核表达载体转染至巨噬细胞,对差异蛋白因子的验证表明,pEGFP-N1-C21、pEGFP-N1-erp4/8/21、pEGFP-N1-CN4/8引起TLR-2、TLR-6、Myd88、TNF-α和IL-8等表达上调(P<0.05),其中pEGFP-N1-erp21引起的上调趋势最为明显;pEGFP-N1-C4/8、pEGFP-N1-N4/8/21、pEGFP-N1-CN21能够引起TLR-2、TLR-6、Myd88、TNF-α和IL-8等表达下调(P<0.05),其中pEGFP-N1-CN21引起的下调趋势最为明显。研究结果显示,所构建的erp系列突变体均能够引起巨噬细胞发生炎性反应,且差异较大,表明erp的N末端、C末端区域以及PGLTS串联重复序列氨基酸的种类和数目的差异对结核分枝杆菌的毒力均有较大的影响。研究结果为进一步阐明erp的作用机制与功能研究提供了理论依据,为牛结核病的诊断与防制奠定了基础。

项目成果

期刊论文数量(6)
专著数量(0)
科研奖励数量(2)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
结核分枝杆菌Erp蛋白研究进展
  • DOI:
    --
  • 发表时间:
    --
  • 期刊:
    中国科技论文在线
  • 影响因子:
    --
  • 作者:
    赵东;马春骥;李敏;马佳丽;徐庆春
  • 通讯作者:
    徐庆春
结核分枝杆菌输出重复蛋白(Erp)8基序突变体的构建及表达分析
  • DOI:
    --
  • 发表时间:
    --
  • 期刊:
    农业生物技术学报
  • 影响因子:
    --
  • 作者:
    马佳丽;王晶;郝秀静;赵东;李勇;张斯民;孙毅;李敏
  • 通讯作者:
    李敏
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  • DOI:
    --
  • 发表时间:
    --
  • 期刊:
    黑龙江畜牧兽医
  • 影响因子:
    --
  • 作者:
    赵东;马春骥;李敏;陈晓虎;张旭强;王红燕
  • 通讯作者:
    王红燕
Molecular cloning of HSP70 in Mycoplasma ovipneumoniae and comparison with that of other mycoplasmas
绵羊肺炎支原体HSP70的分子克隆及与其他支原体的比较
  • DOI:
    --
  • 发表时间:
    --
  • 期刊:
    Genetics and Molecular Research
  • 影响因子:
    0.4
  • 作者:
    Li M.;Ma C. J.;Liu X. M.;Zhao D.;Xu Q. C.;Wang Y. J.
  • 通讯作者:
    Wang Y. J.
绵羊肺炎支原体Y98株未知基因Hsp70(DnaK)的克隆
  • DOI:
    --
  • 发表时间:
    --
  • 期刊:
    中国兽医学报
  • 影响因子:
    --
  • 作者:
    马春骥;李敏;赵东;王玉炯
  • 通讯作者:
    王玉炯

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  • 通讯作者:
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课题项目:调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要:

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题,其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子,其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而,TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用,影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法,探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用,为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义,并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路:

科学问题:TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达?
前期研究:已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应,但其具体机制尚不明确。
研究创新点:本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线:包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术:TRIM2与病毒RNA的相互作用分析,IFN-β启动子活性检测。
实验模型:使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

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          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
      
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