AP-2γ基因在睾丸生殖细胞瘤发生中的分子作用机制研究

AP-2γ基因是睾丸生殖细胞瘤发生的新分子标记。通过对AP-2γ基因进行生物信息学分析，发现在AP-2γ的上游启动子区域有转录因子OCT-4和SRY的结合位点。通过ChIP-PCR实验，我们首先证明OCT-4和SRY都能够结合到AP-2γ的启动子区域。荧光素酶实验结果表明OCT-4能够负调控AP-2γ转录活性，SRY正调控AP-2γ转录活性。下调OCT-4后AP-2γ的荧光素酶表达活性和蛋白水平均能上升；下调SRY表达，导致AP-2γ的荧光素酶表达活性和蛋白表达水平均下降；免疫荧光实验表明，NTera-2细胞内中SRY和OCT-4蛋白分别与AP-2γ在细胞核中有共定位；构建小鼠的隐睾动物模型，我们发现正常小鼠睾丸中Oct-4高表达，AP-2γ低表达；而在小鼠隐睾中Oct-4低表达，AP-2γ却表达上调。我们还证明SMAD4是AP-2γ的靶基因，AP-2γ负调控SMAD4基因的表达。.研究表明阿司匹林、姜黄素可诱导乳腺癌、肝癌等多种癌症细胞发生凋亡，但是二者在人类睾丸生殖细胞肿瘤治疗方面的研究报道却很少。在本研究中，我们通过Hoechst 33258染核、流式分析法等检测阿司匹林或姜黄素对睾丸生殖肿瘤细胞株NTera-2的凋亡影响；采用MTT法检测对NTera-2细胞增殖的影响。研究结果表明，阿司匹林处理后能够促进NTera-2细胞的凋亡、抑制NTera-2细胞的增殖。Caspse8活性检测显示随着阿司匹林的浓度增强caspase8活性增强；阿司匹林诱导后, Western blot检测，FasL表达明显下降， caspase8表达和活性上升都是剂量和时间依赖性的。caspase3前体的表达减少，表明其剪切体活性增强而使细胞凋亡。姜黄素处理NTera-2细胞后可以抑制其增殖并诱导细胞凋亡发生，而且这种细胞凋亡现象具有时间和剂量依赖性。不同剂量的姜黄素处理细胞后， Bcl-2在蛋白水平下降，同时Bax的表达上调，且Cyt-C，Caspase-9，Caspase-3，Caspase-8和PARP均被激活。AP-2γ的表达随着姜黄素剂量增加呈现下降趋势，且其蛋白降解是通过蛋白酶体途径进行的。姜黄素诱导NTera-2细胞凋亡和抑制增殖是通过抑制AP-2γ蛋白调控的下游信号通路。