基于lktA/hly的牛坏死杆菌嵌合保护性抗原的筛选

结题报告
项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    31101835
  • 项目类别：
    青年科学基金项目
  • 资助金额：
    23.0万
  • 负责人：
    郭东华
  • 依托单位：
    黑龙江八一农垦大学
  • 学科分类：
    C1803.兽医细菌及其他微生物学
  • 结题年份：
    2014
  • 批准年份：
    2011
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2012-01-01 至2014-12-31

项目摘要

牛腐蹄病和肝脓肿是由牛坏死杆菌引起的一种常见病和高发病，严重危害我国养牛业的健康发展。随着坏死杆菌耐药性、抗生素残留和灭活疫苗副作用等问题的出现，新型疫苗的开发已成为该病有效防治的关键。本项目根据多表位疫苗的设计思路，利用T7噬菌体展示系统构建牛坏死杆菌保护性抗原白细胞毒素（lktA）和溶血素（hly）的噬菌体表达文库，利用牛坏死杆菌多克隆抗体从肽库中初步淘选lktA和hly的抗原表位区，对淘选的抗原表位区进行表达并印证其抗原性，进一步通过动物试验筛选出具有免疫保护作用的中和抗原表位区，然后将lktA和hly所有的中和表位区进行串联，构建一个多表位区嵌合的保护性抗原，通过动物实验评价其免疫保护效果，为牛坏死杆菌新型亚单位疫苗的开发提供理论基础。

结项摘要

坏死杆菌是引起牛腐蹄病和肝脓肿的主要病原，严重危害养牛业的健康发展。随着坏死杆菌耐药性、抗生素残留和灭活疫苗副作用等问题的出现，新型亚单位疫苗的研究已成为防治该病关键问题。本项目根据多表位疫苗设计思路，利用原核表达系统，对牛坏死杆菌H05菌株的白细胞毒素（lktA）主要抗原区（PL1、PL3和PL4）、溶血素（Hly）和43K OMP外膜蛋白基因进行了截短表达，表达蛋白纯化后，利用坏死杆菌多克隆抗体，通过Western blot对重组蛋白抗原性进行鉴定，然后对鉴定的lktA、Hly和43K OMP抗原区进行嵌合表达，并验证其抗原性和免疫保护作用。结果显示，在牛坏死杆菌lktA主要保护性抗原区PL1、PL3和PL4中，鉴定了6个抗原区，即 PL3-1（aa 1323-1418）、PL3-2（aa 1419-1514）、PL3-5（aa 1705-1799）、PL3-7（aa 1898-2023）、PL4-2（aa 1990-2093）和PL4-3（aa 2094-2207）；在牛坏死杆菌Hly中，鉴定了2抗原区域，即H2（aa 375-475）和H9（aa 979-1073）；在牛坏死杆菌43K OMP中，鉴定了3个抗原区域，即43K-1（aa 18-108）、43K-2（aa 100-199）和43K-3（aa 192-293）。进一步，合成的lktA和Hly8个嵌合串联表位区在大肠杆菌中获得了成功表达。本项目的研究成果为牛坏死杆菌高效亚单位疫苗开发奠定了基础。

项目成果

期刊论文数量（2）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
Identification of a 43-kDa outer membrane protein of Fusobacterium necrophorum that exhibits similarity with pore-forming proteins of other Fusobacterium species
鉴定坏死梭杆菌的 43 kDa 外膜蛋白，该蛋白与其他梭杆菌属的成孔蛋白具有相似性
  • DOI：
    10.1016/j.rvsc.2013.01.016
  • 发表时间：
    2013-08-01
  • 期刊：
    RESEARCH IN VETERINARY SCIENCE
  • 影响因子：
    2.4
  • 作者：
    Sun, Dongbo;Zhang, Hong;Guo, Donghua
  • 通讯作者：
    Guo, Donghua
牛坏死杆菌43Ku外膜蛋白截短片段的原核表达
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2014
  • 期刊：
    中国畜牧兽医
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    吕思文;张红;孙东波;胡柏冬;郭东华
  • 通讯作者：
    郭东华

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其他文献

牛坏死杆菌43kDa外膜蛋白真核质粒在BHK细胞中的瞬时表达
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    中国生物制品学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    张思瑶;王志慧;贺显晶;蒋剑成;汪锋锋;王丽娜;肖佳薇;郭东华
  • 通讯作者：
    郭东华
牛坏死杆菌43K OMP多克隆抗体的制备
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2019
  • 期刊：
    黑龙江八一农垦大学学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    贺显晶;王志慧;张爱辉;蒋剑成;张思瑶;王丽娜;肖佳薇;孙东波;郭东华
  • 通讯作者：
    郭东华
牛坏死杆菌43 kDa OMP单克隆抗体的制备及鉴定
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    中国生物制品学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    贺显晶;张思瑶;蒋剑成;王丽娜;肖佳薇;汪锋锋;孙东波;郭东华
  • 通讯作者：
    郭东华
基于多信息融合的长链非编码RNA的亚细胞定位预测
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2020
  • 期刊：
    内蒙古大学学报（自然科学版）
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    尤晓庆;郭东华;陈颖丽
  • 通讯作者：
    陈颖丽

其他文献

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郭东华的其他基金

43K-OMP在牛坏死杆菌黏附宿主靶细胞中的作用
  • 批准号：
    31572534
  • 批准年份：
    2015
  • 资助金额：
    64.0 万元
  • 项目类别：
    面上项目

相似国自然基金

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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