比较不同干细胞来源造血干细胞移植治疗重型地中海贫血移植后造血和免疫重建的研究

Thalassemia major is a severe hereditary disease. Hematopoietic stem cell transplantation(HSCT) is the only therapeutic option that can cure thalassemia disease.154 patients with thalassemia major had accepted HSCT in our hospital.142 (92%)patients were thalassemia-free survival(TFS).The outcome of the patients with cord blood transplantation(CBT) was inferior than that with bone marrow transplantation(BMT).TFS in CBT and BMT groups were 86.3% and 97.5% ,respectively(P=0.011).We suppose the inferior outcome of CBT is associated with delayed immunohematologic reconstitution after transplatation compared with BMT. In this study, we prospectively investigate the immunohematologic reconstitution in thalassemia major after HSCT with different stem cell source（CB and BM ）. We will study the blood and bone marrow samples of thalassemia patients before HSCT and 1,3,6,12 months posttransplatation. Flow-cytometric analysis, RT-PCR, MACS Cell Separation, Genescan analysis, Enzyme-Linked Immunospot assay, Mixed lymphocyte culture,Colony-forming cell (CFC) assay will be used. The results will help us understanding the character and the impact factor of immunohematologic reconstitution in thalassemia patient after HSCT with different stem cell sources. The study will help to improve the outcome of HSCT(particularly of CBT)for thalassemia in the future.

重型地贫危害极大，造血干细胞移植（HSCT）是根治的唯一方法。我们前期应用HSCT治疗地贫154例，取得了较好的疗效，无地贫生存（TFS）率达92%，但我们发现主要来源脐带血移植（CBT）的疗效明显比骨髓移植（BMT）差，TFS分别为86.3%和97.5%（P=0.0011）。我们推测这结果与CBT移植后造血和免疫重建延迟有关。本课题拟以不同干细胞来源（脐带和骨髓）HSCT地贫患者移植前和移植后不同时点的外周血和骨髓细胞等为对象，采用流式细胞技术、RT-PCR、Genescan分析、免疫磁珠分选、酶联免疫斑点法、混合淋巴细胞培养、造血祖细胞集落培养等实验方法，前瞻性研究和比较不同干细胞来源HSCT地贫患者移植后造血和免疫重建状况，特别是T细胞各亚群的数量及功能重建状况，探讨影响其造血和免疫重建的相关因素。为进一步提高地贫HSCT（特别是CBT）的临床疗效提供实验依据。

研究背景：造血干细胞移植（HSCT）是目前唯一能根治重型β地中海贫血的治疗手段，移植的效果与移植后免疫重建密切相关。但地贫移植后的免疫重建特点相关报导很少。不同干细胞来源移植患者临床特点有差异，考虑与免疫重建特点有关。.目的：前瞻性研究体内去T细胞清髓性同胞异基因造血干细胞移（Allo-HSCT）治疗重型β地贫患者移植后的临床和免疫重建特点。对比脐带血联合骨髓移植（CB+BM）与外周血联合骨髓移植（PB+BM）治疗重型β地中海贫血的临床、造血和免疫重建特点差异。.方法：研究对象为我院住院重型β地贫患者，设健康对照。所有患者均采用体内去T细胞清髓性预处理方案，根据干细胞来源分为脐带血+骨髓联合移植组（CB+BM）和外周血+骨髓联合移植组（PB+BM）。记录患者临床特点和移植后感染、GVHD、出血性膀胱炎、VOD等并发症。采集患者移植前（0m）和移植后1个月、3个月、6个月、12个月外周血进行检测。检测指标包括T、B、NK细胞亚群、功能亚群及代表胸腺和骨髓输出功能的相关指标TRECS和cjKRECS、sjKRECS。实验方法包括流式细胞术、Real-time qPCR和ELISA等。移植后各时间点免疫学指标与移植前进行对比。同时对比不同干细胞来源组患者不同时间点的临床特征、造血和免疫学指标差异。.结果：重型β地贫患者免疫功能指标与健康对照无差异，移植后一年内最常见并发症为感染。移植后T细胞重建和胸腺输出总体恢复缓慢，CD3细胞在移植后12个月恢复至移植前水平，CD4细胞在移植后一年内均未达到移植前水平，CD4/CD8比值移植后1年内均低于移植前水平。总B细胞在移植后第6、12个月恢复至移植前水平，调节性B细胞（Breg细胞）恢复规律同B细胞。NK细胞在移植后1个月就已经恢复到移植前水平，12个月时高于移植前水平，但功能亚群分析显示细胞毒功能受损。移植后一年内，CB+BM组对比PB+BM组总生存率OS无差异，T细胞重建慢，B细胞重建快，淋巴细胞亚群及功能重建有差异。.结论：体内去T细胞清髓性同胞Allo-HSCT治疗重型β地贫患者效果总体令人满意，移植后1年内的高感染发生率与移植后免疫重建延迟有关，应加强对患者的感染和免疫监测。CB+BM和PB+BM对比免疫重建差异可能是两组临床特点差异的主要原因。

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