重组泛素连接酶用于抑制破骨细胞骨吸收活性及其对类风湿关节炎关节破坏的防治作用

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
30972723
项目类别：
面上项目
资助金额：
28.0万
负责人：
李霞
依托单位：
中国人民解放军第四军医大学
学科分类：
H1107.自身免疫性疾病
结题年份：
2012
批准年份：
2009
项目状态：
已结题
起止时间：
2010-01-01 至2012-12-31

项目参与者：
张璟；贾俊峰；卫军霞；党娜娜；苏金；任婷婷；申亮亮；如懿；王秦豪；
关键词：
RA TNF 泛素化 RANK/RANKL 破骨细胞

项目摘要

破骨细胞活性增强是类风湿关节炎（RA）关节破坏的重要环节；RA滑膜组织中多种促炎因子主要通过增强RANKL/RANK系统信号，促进破骨细胞生成与活化，导致骨吸收增强，因此该系统也是治疗RA关节破坏的有效靶位。但目前针对RANKL/RANK的策略均不能阻断其他因素如TNF-α对破骨细胞的直接作用，因此发展新的能够同时阻断两类受体信号转导的方法具有重要的临床意义。文献和我们以往的研究表明，利用"靶向性泛素化"策略可实现降解任意蛋白，且能够针对多个靶蛋白，在疾病治疗领域极具前景。本项目拟通过构建重组泛素连接酶TRIPC-RING和TRIPC-U-box，实现联合降解破骨细胞中RANK和TNFR1下游的共同信号分子TRAF1、2、3、5、6，从而阻断受体信号传递、抑制破骨细胞活性；进一步采用慢病毒载体方式导入小鼠RA模型关节局部，考察其在体的应用效果，为RA关节破坏的防治提供一种新策略。

结项摘要

摘要：破骨细胞活性增强是类风湿关节炎（RA）关节破坏的重要环节；RA滑膜组织中多种促炎因子主要通过增强RANKL/RANK系统信号促进破骨细胞生成与活化，导致骨吸收增强。但目前针对RANKL/RANK的策略均不能阻断其他因素如TNF-α对破骨细胞的直接作用。文献和我们以往的研究表明“靶向性泛素化”策略可实现降解任意蛋白，且具有针对多个靶蛋白的优势。本项目中我们利用U-box型E3的泛素连接酶活性，通过构建重组泛素连接酶实现联合降解破骨细胞中RANK和TNFR1下游的共同信号分子TRAF2、3、5、6，以期阻断受体信号传递、抑制破骨细胞活性、干预RA关节破坏。项目的完成情况如下：首先采用重组PCR构建了可靶向TRAF2、3、5、6的重组泛素连接酶TRIP-U-box；细胞共转染、体内结合实验、体内泛素化实验等证实该重组分子能够有效结合和促进靶蛋白泛素化；成功制备了表达TRIP-U-box的慢病毒并证实其感染小鼠单核-巨噬细胞系RAW264.7后能够促进TRAF6蛋白水平下调。进一步考察该重组泛素连接酶对小鼠RA模型的在体干预效果将可能为RA关节破坏的防治提供一种新策略。项目所取得的成果包括：培养博士研究生1名；硕士研究生1名，发表中文研究论文3篇；申请发明专利1项；整理投递国际期刊论文1篇。