牛微小隐孢子虫Cp23基因在干酪乳杆菌中嵌合型S-层蛋白活菌表达载体系统的构建

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项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    30960279
  • 项目类别：
    地区科学基金项目
  • 资助金额：
    23.0万
  • 负责人：
    格日勒图
  • 依托单位：
    内蒙古农业大学
  • 学科分类：
    C1805.兽医寄生虫学
  • 结题年份：
    2012
  • 批准年份：
    2009
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2010-01-01 至2012-12-31

项目摘要

本研究拟采用牛微小隐孢子虫（ Cryptosporidium parvum ）子孢子抗原Cp23基因和乳酸菌S-层蛋白slp基因前导肽以及蛋白酶PrtP基因为材料，通过DNA重组技术，构建嵌合型S-蛋白干酪乳杆菌（Lactobacillus casei Zhang）活菌载体系统：pMG-slp-LEISSTCDA:Cp23:PrtP。经过电转化将其导入宿主菌体内，在该工程菌的体外培养物中，采用Western blotting和IFAT方法检测Cp23基因的表达产物和位置；并鉴定其与哺乳动物肠上皮细胞黏附特性。工程菌通过口服免疫小鼠以后，检测Cp23抗原特异的抗体（如粘膜IgA和血清IgG）、细胞因子（如IL-12和IFN-γ）和T淋巴细胞亚群（如CD4和CD8）变化。经评价工程干酪乳杆菌在小鼠动物模型中所产生的生物学效应，试图为进一步研制预防牛微小隐孢子虫的新型疫苗研究奠定基础。

结项摘要

牛微小隐孢子虫（C. parvum）是以主要危害牛羊的常见人畜共患的原虫病之一。在全世界范围内，目前对该病的防治没有特效药物和疫苗。本项目以干酪乳杆菌为活菌载体，以牛微小隐孢子虫CP23为抗原，成功构建了胞浆型和分泌型活疫苗载体pMG-p23和pMG-USP45-p23；利用乳杆菌S-层蛋白质独特的结构特性，成功构建锚定型活疫苗载体pMG-SLP-p23。并口服给BALB/c小鼠体，在小鼠体内探讨以上活疫苗载体的抗原性和免疫原性，为开发研制能够有效预防牛微小隐孢子虫病的新型疫苗，进行了系统的探索性研究，具体研究内容和结果如下：.1.成功构建和鉴定出乳杆菌细胞内表达的胞浆型活疫苗载体pMG-p23，解决外源基因cp23基因是否在乳杆菌中有效表达以及该表达产物有无抗原性等关键问题。在乳杆菌中cp23基因的表达产物大小约为23kDa，与天然Cp23蛋白质大小是一致，并以1011cfu/100µL的剂量口服BALB/c小鼠后第14d在血清和粪便中分别检测到特异性抗体IgG和IgA，但是总的抗体滴度不高。采集免疫后的BALB/c小鼠脾脏淋巴细胞，检测细胞因子IL-4、IL-6和IFN-γ，与各类对照组相比较，IL-6和IFN-γ水平提高显著（p＜0.05）。.2.成功构建和鉴定出乳杆菌细胞外分泌表达的分泌型活疫苗载体pMG-USP45-p23，解决外源基因cp23基因是否在乳杆菌中有效分泌以及该分泌表达产物有无抗原性等关键问题。在乳杆菌培养物上清中检测到大小约为23kDa的Cp23蛋白质，并以108cfu/100µL的剂量鼻腔免疫BALB/c小鼠后第14d在血清中分别检测到特异性抗体IgG，但是总的抗体滴度和pMG-p23免疫情况相当，变化不明显。.3.成功构建和鉴定出乳杆菌锚定型活疫苗载体pMG-SLP-p23。在乳杆菌表面洗脱物中检测到大小约为70kDa的Cp23融合蛋白质，并以108cfu/100µL的剂量经鼻腔(口服为1011cfu/100µL)免疫BALB/c小鼠后第14d，分别在血清和粪便中分别检测到特异性抗体IgG和IgA，但是总的抗体水平提高不显著。采集免疫后的BALB/c小鼠脾脏淋巴细胞，检测细胞因子IL-12和IFN-γ，与各类对照组相比较，IFN-γ水平提高显著（p＜0.05），而IL-12水平变化不明显。

项目成果

期刊论文数量（8）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
应用表达微小隐孢子虫P23的重组干酪乳杆菌建立微小隐孢子虫IFAT诊断方法
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    畜牧兽医学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    格日勒图;石泉;王艳霞;兰丽;满达;张和平
  • 通讯作者：
    张和平
微小隐孢子虫p23基因在干酪乳杆菌中的表达及其表达产物的鉴定
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    中国兽医学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    格日勒图;布仁贺希格;白梅;贾洪林;玄学南;张和平
  • 通讯作者：
    张和平
短小乳杆菌内蒙古分离株S-层蛋白的普查、鉴定和基因分析
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    中国畜牧兽医
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    兰丽;魏建民;王艳霞;王敏;满达;格日勒图
  • 通讯作者：
    格日勒图
牛微小隐孢子虫子孢子表面抗原p23 基因的克隆及原核表达
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    内蒙古农业大学学报(自然科学版)
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    那日苏
  • 通讯作者：
    那日苏
几种乳酸菌S-层蛋白的普查以及slp基因的克隆与序列分析
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    中国乳品工业
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    双杰;包秋华;永胜;王艳霞;张和平;格日勒图
  • 通讯作者：
    格日勒图

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    格日勒图
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  • 作者：
    王云冲;黄天鹏;格日勒图
  • 通讯作者：
    格日勒图

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AI项目解读示例

课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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