IκBα对急性肺损伤纤维蛋白沉积的作用及机制研究

We have demonstrated previously that in a acute lung injury model(ALIM) of endothelial cell and platelet interactions. Other studies indicate that NF-κB associates with IκBα,a negative regulator forming an inactive complex. This project will demonstrate that activation of IκBα is responsible for tissue factor expression in hypoxemic vasculature of acute lung injury,thereby triggering a procoagulant pathway eventuating in fibrin formation during acid-induced ALIM. To determine this mechanisms,we will study in lungs excised from mice over expressing IκBα.IκBα,TF,VE-cadherin,PAI-1detected by real-time confocal microscopy,FACS and TR-PCR et al. This study will reveal IκBα regulation by TF-IκBα-NF-κB fibrin deposition signaling pathway, and will provide a new insight into the interactive mechanism of endothelial cell and platelet.

本项目组预实验发现急性肺损伤（ALI）模型中血管内皮细胞和血小板之间相互作用，结合国外研究表明ALI过程中存在促凝、纤维蛋白沉积和组织生长因子（TF）高表达现象，提出肺血管内促凝/纤溶调控失衡是ALI形成的一个重要特征，而IκBα是一个NF-κB信号通路的负反馈调节因子，新近发现对抑制血管内纤维蛋白沉积起重要作用。本课题拟复制盐酸诱发ALI小鼠模型，观察肺血管内纤维蛋白生成变化，检测肺组织IκBα、TF、VE-钙粘素表达及定位；通过构建IκBα真核表达载体，制备包裹IκBα基因与抗vWf（主要表达于内皮细胞）抗体耦联的免疫脂质体体内转染，使IκBα特异性表达于肺血管内皮细胞，通过RT-PCR、FACS、共聚焦显微镜等方法，观察对血管内纤维蛋白生成的抑制作用和对ALI形成的影响，揭示IκBα对ALI血管内促凝/纤溶失衡的调控机制，为ALI中内皮细胞和血小板相互作用提供部分理论依据和实验基础。

背景：尽管项目组实验发现急性肺损伤（ALI）模型中血管内皮细胞和血小板之间相互作用，肺血管内促凝/纤溶调控失衡是 ALI 形成的一个重要特征。IκBα是一个 NF-κB信号通路的负反馈调节因子，新近发现对抑制血管内纤维蛋白沉积起重要作用。IκBα如何激发肺血管内促凝/纤溶的机制仍不是很清除。.主要研究内容：本课题应用复制盐酸诱发 ALI 小鼠模型，观察肺血管内纤维蛋白生成变化，检测肺组织IκBα、TF、VE-钙粘素表达及定位；通过构建IκBα真核表达载体，制备包裹IκBα基因与抗 vWf（主要表达于内皮细胞）抗体耦联的免疫脂质体体内转染，使IκBα特异性表达于肺血管内皮细胞，通过 RT-PCR、FACS、共聚焦显微镜等方法，观察对血管内纤维蛋白生成的抑制作用和对ALI 形成的影响，以及IκBα对 ALI 血管内促凝/纤溶失衡的调控机制。.研究结果及科学意义：揭示了血小板天然的供应线粒体给内皮细胞和白细胞，在盐酸致急性肺损伤模型的发生发展过程中起重要作用，为 ALI提供部分理论依据和实验基础。

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