乳腺癌前哨淋巴结转移状态的预测：前期已筛选的分子标志物的验证及术中快速诊断方法的建立

Sentinel lymph node (SLN) biopsy is the routine surgery procedure in early breast cancer patients. SLN positive patients may avoid the suffering of axillary lymph node (ALN) dissection, while the negative patients remain controversial, which need to make clear the metastatic status of non-sentinel lymph node (NSLN). However, the available molecular biomarkers for non-sentinel lymph node status prediction are still lacking. In our previous work, using next-generation RNA sequencing technology, we have screened 150 specifically expressed gene and 10.specifically fused genes from the metastatic SLN of the breast cancer patients. In this project, by adding more patients samples and with the sequencing panel consisted above genes, we plan to confirm which genes really play significant role in clinic. Further, we intend to analyze those genes’ function and mechanism in lymph node metastasis by enhancing or decreasing their expression in cell line experiment. Finally, we would try to integrate the verified genes into the intra-operative rapid diagnostic method that we previously established, aiming to verify whether it could guide the selection of appropriate surgery strategies with breast cancer patients’ SLN samples. Our research has good prospect in academic value as well as clinical application, since it may contribute to our deep insight for the mechanism of lymph node metastasis. Meanwhile, it may also facilitate the implementation of appropriate surgery strategies for breast cancer patients.

前哨淋巴结（SLN）活检是早期乳腺癌外科手术的标准步骤，SLN阴性患者可避免腋窝淋巴结（ALN）清扫所带来的副作用，而SLN阳性患者则仍有争议，需进一步明确SLN之外的ALN，即非前哨淋巴结（NSLN）的转移状态，但目前尚无公认有效的分子标志物。在前期工作中，我们已通过下一代RNA测序技术从患者SLN转移灶中筛选出了150个特异表达的基因和10个特异的融合基因。在本课题中，我们拟加大样本量，借助多基因测序进一步筛选上述基因中更有临床意义的子集；进而，我们拟通过细胞实验，通过增强或抑制相关基因的表达来分析其参与淋巴结转移的功能和机制；最终，将经过验证的基因整合到我们前期建立的术中快速诊断技术之中，通过患者标本的检测，验证其能否在术中有效指导SLN阳性患者的手术策略。本研究将有助于我们深入了解乳腺癌淋巴结转移的分子机制，并有望优化SLN阳性患者的手术策略，具有重要的科学意义以及良好的应用价值。

前哨淋巴结（SLN）的术中快速活检是早期乳腺癌的标准手术步骤，但目前判断SLN转移状态的方法还有很多不足：病理学方法的主观性强，准确性低；而现有分子生物学方法的价格高，且很难在术中完成。本课题在前期工作中已经建立了一个SLN的术中快速诊断方法，但是在样本处理环节存在不足。在本课题中，我们主要从以下三个方面进行了优化。首先，我们研制了淋巴结的快速研磨装置，保证将淋巴结之中的RNA尽快释放出来。该方法简单便捷，2分钟之内可以完成操作，一次性使用可以避免样品之间的交叉污染。该装置已经申请并获得实用新型发明专利。其次，我们研制测试了一种样本快速裂解液，与研磨装置配合使用，可以将核酸提取的时间控制在10分钟左右。最后，我们设计研发了一种淋巴结的快速切取装置。该装置可以在2分钟之内将样本迅速的切分为四等份，操作简单省时，刀头为一次性耗材而且经过了RNA酶处理，能够有效防止样品之间的交叉污染。该装置也已经申请并获得实用新型发明专利。依托本课题的研究结果，前哨淋巴结的整体检测时间有望缩短至1个小时之内，已经初步具备在手术室中开展的条件。如果将来经过大样本量的临床验证，本方法有望为乳腺癌患者的前哨淋巴结术中快速活检提供有益的帮助。

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