骨骼肌细胞衰老进程中INK4a通路与线粒体功能间动态相关性的研究

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项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    81000812
  • 项目类别：
    青年科学基金项目
  • 资助金额：
    20.0万
  • 负责人：
    廖翔
  • 依托单位：
    广东医科大学
  • 学科分类：
    H0608.骨、关节、软组织退行性病变
  • 结题年份：
    2013
  • 批准年份：
    2010
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2011-01-01 至2013-12-31

项目摘要

INK4a通路与线粒体是调控细胞衰老的两个中心环节， INK4a通路去阻遏和线粒体损伤都将导致细胞生长停顿并出现衰老表型。既往研究发现INK4a通路与线粒体之间存在种种联系，但两者间确切的依赖和制约机制尚未得出。本课题选取线粒体含量较高的骨骼肌细胞为对象：①检测INK4a通路阻遏（"失活"）和去阻遏（"失控"）时线粒体功能的动态变化，研究INK4a通路对线粒体功能的正向调控机制。其中，拟采用基因沉默技术特异性抑制p16ink4a表达，使通路阻遏；拟采用p16ink4a与hRb1双基因共导入技术（真核表达载体已在前期建立），使通路去阻遏。②分别以活性氧化剂过氧化氢及拮抗剂维生素E使线粒体损伤加速和延迟，观察两种情况下INK4a通路信号转导的动态变化，研究线粒体功能对INK4a通路的逆向调控机制。③对两者间具体作用方式进行探索。研究结果将为阐明两途径间关键生物大分子的相互作用关系提供重要证据。

结项摘要

目的：观察p16ink4a蛋白对骨骼肌卫星细胞衰老的诱导，并探寻其机制。.方法：采用机械法和胶原酶消化法，结合差速贴壁技术，分离培养人卫星细胞， desmin与myf-5抗体免疫荧光染色鉴定。构建慢病毒载体pLVX-p16ink4a，感染人骨骼肌卫星细胞，用Western blotting法测定蛋白水平；用β-半乳糖苷酶染色鉴定细胞衰老程度，JC-1染色及流式细胞仪观察线粒体膜电位变化，同时用Western blotting法检测转染后不同时间点bcl-2、bax、bak蛋白的表达变化。.结果：desmin与myf-5抗体免疫荧光染色鉴定结果表明获得了高纯度的骨骼肌卫星细胞。β-半乳糖苷酶染色可见转染组细胞蓝染显著多于对照组。JC-1染色及流式细胞仪结果表明p16ink4a蛋白使得卫星细胞线粒体膜电位降低，Western blotting法对转染后不同时间点卫星细胞bcl-2、bax、bak蛋白表达变化的检测结果表明：bcl-2表达呈现下降趋势，而bax、bak则表现出表达增加。.结论：p16ink4a蛋白可诱导骨骼肌卫星细胞衰老，主要分子机制可能是：1、使得定位于线粒体膜表面的凋亡抑制蛋白bcl-2表达下降；2、使促凋亡蛋白bax、bak表达上升；通过上述两个途径共同促使线粒体膜通道打开，膜电位降低，卫星细胞踏上衰老进程。

项目成果

期刊论文数量（3）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
Screening of HLA-A2.1-Restricted CTL Epitopes Derived from Ewing's Sarcoma EWS-FLI1 Fusion Protein by Using Molecular Simulation
利用分子模拟筛选尤文氏肉瘤EWS-FLI1融合蛋白衍生的HLA-A2.1限制性CTL表位
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2010
  • 期刊：
    Acta Chimica Sinica
  • 影响因子：
    2.5
  • 作者：
    An Hong;Huang Lu;Lin Zhihua;Shu Yong;Han Zhimin;Huang Shanhu;Liao Xiang;Wang Yuanqiang;Peng Fangyi
  • 通讯作者：
    Peng Fangyi
人骨骼肌成肌细胞体外分化的全程观察及INK4a信号通路对其衰老的诱导研究
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    中华实验外科杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    赵丽霞;李蓉;熊东林;姚尚龙;廖翔
  • 通讯作者：
    廖翔
Prediction and identification of B cell epitopes derived from EWS/FLI-l fusion protein of Ewing's sarcoma
尤文肉瘤EWS/FLI-1融合蛋白B细胞表位的预测与鉴定
  • DOI：
    10.1007/s12032-012-0243-7
  • 发表时间：
    2012-12-01
  • 期刊：
    MEDICAL ONCOLOGY
  • 影响因子：
    3.4
  • 作者：
    Liu, Huiwen;Huang, Lu;Cao, Kai
  • 通讯作者：
    Cao, Kai

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其他文献

利用串联亲和纯化技术分离大肠杆菌GroEL蛋白复合物
  • DOI：
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  • 发表时间：
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  • 期刊：
    微生物学通报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    魏波;廖翔;周围;王羽;李玉霞;高原;岳俊杰;梁龙;呼和巴特尔
  • 通讯作者：
    呼和巴特尔
尤文肉瘤EWS-FLI1蛋白HLA-A2.1限制性CTL表位的预测、筛选及鉴定
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2010
  • 期刊：
    免疫学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    安洪;邓高荣;袁铿;赵金华;廖翔;曹凯;舒勇;黄山虎;陈文昭;黄路;张战民
  • 通讯作者：
    张战民
细胞周期蛋白依赖的蛋白激酶抑制剂4a信号通路对人骨骼肌成肌细胞衰老的诱导及对线粒体膜电位的调控
  • DOI：
    10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2017.06.007
  • 发表时间：
    2017
  • 期刊：
    中华实验外科杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    唐硕;高翃;闫栋;杨娟;李卓伦;胡鹏涛;熊东林;廖翔;Tang Shuo;Gao Hong;Yan Dong;Yang Juan;Li Zhuolun;Hu Pengtao;Xiong Donglin;Liao Xiang
  • 通讯作者：
    Liao Xiang
双向BN/SDS-PAGE分离鉴定痢疾杆菌福氏5型M90T株毒力相关膜蛋白复合物
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2011
  • 期刊：
    生物技术通报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    龚益熊;廖翔;朱力;吴兰;周晓巍;梁龙;黄培堂;Gong Yixiong1 Liao Xiang2 Zhu Li2 Wu Lan1 Zhou Xia;Institute of Biotechnology,Academy of Military Med
  • 通讯作者：
    Institute of Biotechnology,Academy of Military Med
弗氏志贺菌5a型M90T株ClpB蛋白在大肠杆菌中的融合表达和纯化
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    生物技术通讯
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    王羽;WANG Yu1,2, ZHOU Wei1, LIAO Xiang1, WEI Bo1,2, RAN;2. College of Veterinary Medicine, Inner Mongolia;China;周围;廖翔;魏波;冉金宝;高原;呼和巴特尔;岳俊杰;梁龙
  • 通讯作者：
    梁龙

其他文献

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

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          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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