KIT蛋白在羊驼毛囊毛乳头细胞的表达及与毛色关系的研究

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AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    31072097
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    34.0万
  • 负责人：
    张巧灵
  • 依托单位：
    吉林大学
  • 学科分类：
    C1801.基础兽医学
  • 结题年份：
    2013
  • 批准年份：
    2010
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2011-01-01 至2013-12-31

项目摘要

毛囊发育和周期性生长的信号途径在人、猪等物种上已取得重要的研究进展，KIT基因是控制毛色的主要候选基因，其突变方式在不同动物中具有不同的遗传效应。羊驼作为一种主要以产毛为主的经济动物，其毛囊发育和毛色形成及与候选基因的关系研究尚为空白。KIT基因对羊驼毛色的影响、分子调控机理及其变异对羊驼毛色所产生的温和多效性影响，国内外报道较少。本研究在课题组已分析羊驼毛囊超微结构及KIT蛋白在不同毛色羊驼毛囊表达差异的基础上，针对毛囊干细胞研究所面临的难点，进一步采用显微分离和消化相结合的方法，分离培养不同毛色羊驼毛乳头细胞，观察其形态特征和生长状况；在此基础上，通过原位杂交与基因转染等技术研究不同毛色羊驼毛囊体外培养细胞中KIT蛋白表达变化及其与毛色的关系，揭示KIT基因通过毛乳头细胞调控羊驼毛色蛋白表达的机理，阐明羊驼毛色形成的分子机制，以期为利用分子生物学技术人工调控或改造动物毛色提供科学依据。

结项摘要

在人、猪等物种上，毛囊发育和周期性生长的信号途径已取得重要的研究进展，KIT基因是控制毛色的主要候选基因，其突变方式在不同动物中具有不同的遗传效应。羊驼作为一种主要以产毛为主的经济动物，其毛囊发育和毛色形成及与候选基因的关系研究尚为空白。课题组在已分析羊驼毛囊超微结构及KIT蛋白在不同毛色羊驼毛囊表达差异的基础上，通过分离原代细胞并鉴定后进行传代培养，同时通过原位杂交与基因转染等技术研究不同毛色羊驼毛囊体外培养细胞中KIT蛋白表达变化及其与毛色的关系。课题组首先采集羊驼背部皮肤组织，用胰酶消化粘连组织，直接于显微镜下取毛囊于加有2% BSA、5 μl/ml胰岛素、0.5 μg/ml氢化可得松、10 ng/ml EGF和10 ng/ml IGF-1的DMEM/F12培养基中进行培养，并于显微镜下观察其形态特征和生长状况，结果显示：新分离的羊驼毛乳头细胞呈长梭型，接种于培养基中1 h后可见一部分细胞贴壁，6 h后开始大量贴壁，但随着培养时间的增长，细胞增殖并呈现聚集生长现象；当细胞快融合时用0.25%的胰蛋白酶37℃消化5 min进行传代培养；传代的细胞呈现多角型，传代后4-5天开始呈对数生长，约2周达到高峰。将分离的毛乳头细胞提取RNA和DNA扩增后测序，发现DNA片断长1280 bp, cDNA长426 bp，intron16与exon17交际处有AG规则，符合分子遗传学的理论；exon2 cDNA长242 bp，编码含75个氨基酸残基的蛋白；与其它物种相似性达90%以上，证实羊驼毛囊毛乳头细胞中表达KIT蛋白。流式细胞仪测定分离的羊驼毛乳头细胞的周期结果显示第一代细胞增殖能力相对较强，随着传代次数增加，细胞的增殖能力下降，细胞生长越来越慢，指数生长期也越来越短，但大部分仍处于静止期，具有一定的增殖能力。原位杂交实验结果显示探针浓度在1:100稀释时较为理想。

项目成果

期刊论文数量（6）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（1）
专利数量（0）
黑素皮质素受体1（MC1R）基因与VC-獭兔毛色关系的研究
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    畜牧兽医学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    高荣琨;陈伟;李建平;曲海娥;张巧灵
  • 通讯作者：
    张巧灵
霍阿基亚型羊驼KIT基因exon2的克隆与序列分析
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    中国畜牧兽医
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    高荣琨;李建平;曲海娥;江倩;陈伟;王莹;张巧灵
  • 通讯作者：
    张巧灵
细毛羊黑素皮质激素受体1(MC1R)基因与毛色表型的研究
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
    黑龙江畜牧兽医
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    陈伟;曲海娥;李建平;黄清华;张佳莹;张巧灵;刘波
  • 通讯作者：
    刘波
Expression and localization of vascular endothelial growth factor (VEGF)and changes of microvessel density (MVD) during hair follicle development cycle of Liaoning cashmere goats
辽宁绒山羊毛囊发育周期中血管内皮生长因子(VEGF)的表达、定位及微血管密度(MVD)的变化
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    Genetics and Molecular Research
  • 影响因子：
    0.4
  • 作者：
    Qiaoling Zhang;Jianping Li;Yumei Li;Qing Chang;Yang Chen;Huaizhi Jiang;Zhihui Zhao;Dan Guo
  • 通讯作者：
    Dan Guo
绒山羊黑素皮质素受体4(MC4R)基因的克隆与序列分析
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
    中国兽医学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    曲海娥;陈伟;李建平;王莹;黄清华;张巧灵
  • 通讯作者：
    张巧灵

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  • 发表时间：
    --
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  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    吴腾飞;胡哲;张巧灵;邓旭明;刘波;WU Tengfei1;HU Zhe2;ZHANG Qiaoling1;DENG Xuming1;L;2 Harbin Veterinary Research Institute;Harbin 1500
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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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