抑制素基因免疫对大鼠精子发生和睾丸组织结构的作用及其机制研究

我们前期研究证明，抑制素基因免疫雌性动物可以促进卵泡发育和超数排卵。但是，关于抑制素基因免疫对雄性动物生殖活动是否有影响国内外尚无报道。本研究利用我们以前构建的抑制素基因疫苗（pcISI和pEGISI）免疫雄性大鼠，运用RT-PCR基因扩增、流式细胞分类、West-Blot、电镜观察、细胞培养、细胞转染和放射免疫测定等技术，研究抑制素基因免疫对睾丸和附睾组织生化功能、精子发生、生殖细胞凋亡及相关蛋白表达、睾丸间质细胞增殖与凋亡、间质细胞信号通路、芳香化酶活性、睾酮水平、睾酮合成相关酶表达等的组织特异性作用，旨在：①从分子和细胞水平弄清抑制素基因免疫对雄性动物精子发生和性欲的调节作用及机制，为开发防治雄性动物不育症和提高雄性动物繁殖力的新技术奠定基础。②进一步分析影响抑制素基因疫苗免疫雄性动物的因素，获得最适免疫程序与方法，促进基因免疫技术在动物繁殖中的推广与应用。

1. 阐明了抑制素基因疫苗免疫与大鼠免精子发生的调控作用及机理. 分析抑制素基因疫苗免疫对雄性大鼠抑制素抗体水平、精子发生、附睾生化、对睾丸细胞凋亡及生殖内分泌作用。结果表明：免疫组大鼠P/N值均明显升高，与对照组有统计学意义。免疫后中剂量组睾丸系数显著高于空质粒组（P＜0.05)。与对照组相比，中或低剂量组睾丸内GGT、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、乳酸脱氢酶、α-中性葡萄糖苷酶活性有差异且有统计学意义。免疫后高和中剂量组精子畸形率均低于对照组（P＜0.01）；高剂量组精子数目低于对照组（P＜0.05），中剂量组睾丸细胞凋亡率高于对照组（P＜0.01）。初次免疫后第二周中剂量组FSH水平高于对照组（P＜0.05），第一次加强免疫后第二周高或低剂量组睾酮（T）水平均显著高于对照组（P＜0.05）。上述结果说明，抑制素基因免疫能提高抑制素抗体水平并促进大鼠睾丸发育，降低精子畸形率，对睾丸细胞凋亡和雄性大鼠分泌促卵泡素（FSH）和睾酮（T）有影响。.2. 阐释了抑制素基因疫苗免疫对大鼠性欲的调节作用及机理 . 用抑制素重组基因质粒pEGISI转染大鼠睾丸间质细胞，分析其对间质细胞增殖、凋亡及睾酮分泌的影响。结果表明, 分离获得大鼠原代睾丸间质细胞活率为96.33%，纯度为91.9%；当lipofectamine LTX用量为2μL，质粒pEGFP用量为1.0μg时，转染效率最好（39.20±4.50%）； lipofectamine LTX用量为2μL，质粒pEGISI用量为1.0μg，转染效率最高（33.68±1.67%）。PEGISI转染组间质细胞增殖率显著低于对照组（P＜0.05）。pEGISI转染48h后细胞凋亡率与对照组差异极显著（P＜0.01）。转染睾丸间质细胞48-96h，对照组和pEGISI组睾酮分泌量都极显著升高（P＜0.01）；转染48-96 h后，pEGISI转染组睾酮分泌量低于对照组，差异极显著（P＜0.01），转染96h后pEGISI转染组睾酮分泌量极显著高于空质粒组（P＜0.01）。上述结果说明，pEGISI转染睾丸间质细胞后对其细胞的增殖和凋亡没有明显影响，但能促进睾酮分泌。

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