NAP1L1蛋白与HDGF蛋白直接相互作用进而诱导胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移的分子机制

NAP1L1 was overexpressed in glioma tissues, and knockdown of NAP1L1 inhibited glioma cell proliferation, invasion and migration. Moreover, silence of NAP1L1 inactivated PI3K/Akt pathway. Further Co-IP assay suggested HDGF may be the interacting protein of NAP1L1. Knockdown of NAP1L1 silenced the protein level of HDGF but not effect on mRNA level, and multiple sites of ubiquitination were identified by analyzing with Compendium of Protein Lysine Modifications database. Thus, NAP1L1 might sustain high expression of HDGF by inhibiting ubiquitination of HDGF. Besides, previous study confirmed HDGF promoted glioma cell growth, invasion and migration through PI3K/Akt pathway. Consequently, we supposed NAP1L1 mediates HDGF by protein interaction, and promotes glioma cell growth, invasion and migration through PI3K/Akt pathway. Subsequent study mainly focused on the regulating relationship between NAP1L1 and HDGF, as well as their cellular function in glioma. These findings will provide a new sight for clarifying the molecular mechanism of glioma development.

前期研究表明NAP1L1在胶质瘤中高表达，干扰胶质瘤细胞中NAP1L1的表达后细胞的增殖、侵袭和迁移能力显著被抑制。同时干扰胶质瘤细胞中NAP1L1的表达后PI3K/Akt通路的关键分子p-PI3K和p-Akt均显著下调。进一步免疫共沉淀提示HDGF蛋白可能是NAP1L1的候选直接相互作用蛋白。干扰NAP1L1可以抑制HDGF蛋白表达但不影响mRNA的表达，而蛋白质赖氨酸数据库发现HDGF有多个泛素化位点。此外，有研究显示HDGF可以通过PI3K/Akt通路促进胶质瘤细胞的EMT。据此推测NAP1L1在胶质瘤中可能通过与HDGF直接相互作用并抑制其泛素化降解，通过PI3K/Akt通路促进了胶质瘤细胞的EMT。进一步工作围绕NAP1L1和HDGF的相互关系展开，并进一步验证两者在胶质瘤中的功能、表达及与预后的关系。本课题若进展顺利，将为阐明胶质瘤发生及发展的分子机制提供一个新的思路。

众所周知胶质瘤的预后非常差，因为它的发病机制和潜在的顺铂化疗耐药机制仍不清楚。核小体组装蛋白1样1（NAP1L1）被认为是恶性肿瘤的分子标志。然而，NAP1L1在胶质瘤中的作用仍然未知。在这项研究中，我们旨在研究NAP1L1在胶质瘤中的分子功能及其是否参与了顺铂的化疗耐药。NAP1L1在癌症基因组（TCGA）数据库中的样品中被发现上调。免疫组化表明与癌周组织相比胶质瘤中NAP1L1和肝癌衍化的生长因子（HDGF）的表达增强。 NAP1L1和HDGF的高表达与WHO分级，KPS，KI-67指数和复发率呈正相关。此外，NAP1L1的表达也与胶质瘤组织中的HDGF表达呈正相关。功能性研究表明，敲低NAP1L1可以在体外和体内显着抑制胶质瘤细胞增殖，以及增强胶质瘤细胞在体外对顺铂（CDDP）的敏感性。从机制上来看，NAP1L1可以在蛋白质水平与HDGF发生相互作用，并且它们共定位于细胞质中。在 NAP1L1过表达的胶质瘤细胞中敲低HDGF能够显著抑制细胞增殖。此外，HDGF可以与c-Jun相互作用，c-Jun是一种致癌转录因子，能够最终诱导细胞周期启动子CCND1/CDK4/CDK6的表达。该发现表明NAP1L1可以与HDGF相互作用，后者招募了c-Jun，一种关键的致癌转录因子，进一步诱导CCND1/CDK4/CDK6表达，最终促进胶质瘤细胞中的增殖和化疗耐药。NAP1L1在胶质瘤组织中的高表达表明胶质瘤患者更短的总体生存期。

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