基于过敏原组学的红花注射液致敏成分的研究

红花注射液，山西省原研品种，临床应用广泛，疗效确切。然而，日趋增多的红花注射液源性过敏症及新近出台的《中药注射剂安全性再评价方案》提示，该过敏问题亟待解决。目前用于中药注射液过敏问题的研究方法大致分为以下两种：建立动物模型鉴别注射液的过敏性；通过动物实验考察某一明确成分的致敏性。由于红花注射液成分复杂，以上方法均无法（快速）探明其致敏物质基础，亦无法解释、解决红花注射液的过敏问题。本课题在科学分析红花注射液致敏原特性的基础上，应用过敏原组学原理和实验方法研究、确认其中的致敏原：沉淀分离蛋白类成分，人工孵育制备小分子的完全抗原；双向电泳分离、免疫印迹定位抗原；胰蛋白酶水解获得目标抗原；波谱分析探明致敏原结构；动物实验验证各成分的致敏性。本研究可确认红花注射液致敏原的种类、结构及性质；所得结果为红花注射液安全性再评价提供可靠的研究资料；本课题的创新设计可为其他中药注射液致敏成分的研究提供借鉴。

红花注射液作为山西省原研品种，临床应用广泛，疗效确切。然而，日趋增多的红花注射液源性过敏症及国家出台的《中药注射剂安全性再评价方案》提示，该过敏问题亟待解决。本课题在科学分析红花注射液致敏原特性的基础上，应用过敏原组学原理和实验方法研究、确认其中的致敏原。. 本研究首先收集有过敏报道的红花注射液并进行动物致敏性检验，针对阳性样品开展工作。课题将红花注射液可能的致敏原分为两种：蛋白类大分子物质和其余小分子成分并分别对其研究。. 一方面，采用丙酮沉淀法初步富集阳性样品中的蛋白类物质，经豚鼠ASA法检验，证实该蛋白混合物确实具有致敏特征，需要进行深入研究。通过TCA-丙酮法及Clean-Up除杂，经2-D电泳结合Western-Blot定位致敏蛋白位置，挖点进行酶解及LC-MS-MS分离、绿色植物数据库搜索，获得与可疑蛋白点匹配的蛋白名称、理论分子量、肽段序列及理论等电点等信息。根据Western-Blot结果，采用丙酮沉淀、离子交换树脂DEAE-52及透析等得到较为纯净的致敏蛋白，运用豚鼠ASA、大鼠PCA、BN大鼠ASA、组胺Elisa及组织病理切片等方法验证所得纯化致敏蛋白的致敏性。. 另一方面，阳性样品经过丙酮多步沉淀，溶液部分浓缩并挥尽有机溶剂可得小分子物质。同样，在进一步研究之前，进行了动物的致敏性检验。首先采用豚鼠ASA、大鼠PCA法，未获得阳性结果。根据国内外过敏相关研究进展，后期增加BN大鼠ASA、组胺Elisa及组织病理切片等方法共同检验，但均未发现该类物质具有致敏性。因此本课题暂不针对其进行深入探索。. 本研究首次将2-D电泳与Western-Blot相结合的技术应用于红花注射液过敏原的筛查，并发现具有致敏作用的物质为残留的蛋白类成分，通过质谱鉴定获得可疑致敏蛋白物质的相关信息。本课题确认了红花注射液致敏原的种类及性质；所得结果为红花注射液安全性再评价提供可靠的研究资料；本课题所采用的分类确证、分类研究的实验方法可为其他中药注射液致敏成分的研究提供参考。

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