β2-糖蛋白Ⅰ介导乙型肝炎病毒入侵肝细胞的路径研究

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
30971353
项目类别：
面上项目
资助金额：
31.0万
负责人：
高普均
依托单位：
吉林大学
学科分类：
H0309.炎性及感染性肝病
结题年份：
2012
批准年份：
2009
项目状态：
已结题
起止时间：
2010-01-01 至2012-12-31

项目参与者：
王小丛；高沿航；秦俊杰；王春光；荆雪；王中锋；
关键词：
HBV Hepatocyte β2GPI AnnexinⅡ

项目摘要

β2-糖蛋白Ⅰ（β2GPⅠ）是由肝脏产生血浆中较丰富的糖蛋白，参与脂肪的转运及代谢，是自身免疫性疾病的免疫原或辅助因子。我们在前期工作中验证了β2GPⅠ可与乙型肝炎病毒（HBV）特异结合，而且首次发现肝癌细胞株SMMC-7721 的细胞膜上存在与β2GPI特异结合的蛋白，并已鉴定该蛋白为膜联蛋白Ⅱ（Annexin II）。此后，我们利用人原代肝细胞，得到了同样的结论。由此我们推断，既然β2GPⅠ可与HBV特异结合，又与肝细胞膜的Annexin II特异结合，那么，β2GPⅠ极有可能介导HBV入侵肝细胞。本研究拟在前期工作的基础上，利用受体重建实验及结合与内化实验明确AnnexinⅡ为肝细胞膜上β2GPⅠ的特异性受体，并且探讨HBV是否通过β2GPⅠ介导入侵肝细胞。本研究的实施与完成将为乙型肝病发病机制的阐明以及未来对HBV的防治工作具有重要现实意义及理论价值。

结项摘要

β2-糖蛋白I(β2GPI)是由肝细胞合成，血浆中含量丰富的糖蛋白。在前期工作中，验证了β2GPI与rHBsAg特异性结合，发现人原代肝细胞及SMMC-7721细胞膜上存在与β2GPI特异结合的蛋白，并鉴定为膜联蛋白Ⅱ(AnnexinⅡ或ANX2)。本研究在前期工作基础上，通过免疫印迹、免疫共沉淀、液相放射免疫法、细胞免疫荧光、酶联免疫吸附测定等方法进一步研究了β2GPI在HBV侵染肝细胞途径中的作用。结果表明，HepG2.2.15细胞中β2GPI含量明显增高，ANX2含量明显减少；β2GPI、AnnexinⅡ共定位于细胞膜上；β2GPI与HBsAg间有较强相互作用，β2GPI与AnnexinⅡ间存在瞬时、不稳定性弱相互作用，AnnexinⅡ与HBsAg无明显相互作用，推断乙肝病毒以HBV-β2GPI复合物形式与细胞膜上AnnexinⅡ作用；β2GPI与rHBsAg共孵育后，rHBsAg与细胞表面结合能力增强，在非肝脏来源非HBV易感细胞293T中，此作用更明显，因此认为β2GPI促进HBV与细胞表面粘附。临床标本检测发现肝硬化患者血清β2GPI水平明显降低，且慢性乙型肝病患者血清β2GPI水平与血清白蛋白（ALB）含量呈正相关。推测β2GPI与HBV感染后肝脏损害程度及肝细胞储备功能变化有关，可能成为乙肝相关性肝硬化的预警因子。本研究成果进一步揭示β2GPI作为粘附受体介导HBV与细胞表面结合，辅助病毒侵染肝细胞这一机制，为有效预防和治疗乙肝病毒感染提供重要线索和依据。