基于广谱性抗体的兽药多残留免疫分析研究

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AI项目解读

基本信息

  • 批准号:
    30830082
  • 项目类别:
    重点项目
  • 资助金额:
    170.0万
  • 负责人:
  • 依托单位:
  • 学科分类:
    C1808.兽医药物学与毒理学
  • 结题年份:
    2012
  • 批准年份:
    2008
  • 项目状态:
    已结题
  • 起止时间:
    2009-01-01 至2012-12-31

项目摘要

养殖业中兽药的广泛应用甚至不规范应用,造成了动物源食品中兽药残留的多样化和复杂性,给监控工作带来了极大挑战。研究建立可同时检测同类或不同类多种兽药残留的免疫分析技术是解决这一问题的有效途径,而兽药多残留快速免疫分析技术的突破有赖于兽药分子广谱性抗体的获得。围绕上述问题,本项目拟选用磺胺类、喹诺酮类等兽药,确定同类兽药分子的共有抗原决定簇;通过兽药分子结构改造,获得最佳半抗原;研制出广谱性单克隆抗体和天然基因重组抗体;建立兽药分子-抗体的定量构效关系(QSAR)以评价广谱性抗体的亲和力和特异性;应用QSAR、氨基酸序列对比和蛋白质同源模拟技术,建立兽药分子-抗体互作虚拟模型,以指导天然基因重组抗体结构改造,获得改良的广谱性重组抗体;建立灵敏度高、检测谱广的量子点荧光、荧光偏振和化学发光等兽药多残留快速免疫分析检测技术,为我国动物源食品中兽药残留检测提供理论依据和技术保障。

结项摘要

设计合成了磺胺类、大环内酯类和β-兴奋剂类等兽药半抗原23种,筛选出最佳半抗原7种。制备出上述兽药的广谱性单克隆抗体和重组抗体9种,其中单克隆抗体4D11可以识别22种磺胺类药物,重组抗体anti-NOR scFv可以识别17种喹诺酮类药物。建立了基于广谱性抗体的磺胺类和阿维菌素的多残留快速检测ELISA法、喹诺酮类药物的多残留快速检测荧光偏振免疫分析法和基于喹诺酮类药物基因重组抗体的化学发光免疫法各1个;建立了基于多元标记的免疫分析检测技术3个,包括辣根过氧化物酶、量子点标记的可同时检测磺胺类、喹诺酮类和三聚氰胺的杂合免疫分析技术、四种荧光素标记的可同时检测磺胺类、喹诺酮类、链霉素和头孢氨苄的荧光偏振免疫分析技术和辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶标记的可同时检测磺胺类和喹诺酮类药物的双显色ELISA技术,上述方法的灵敏度和稳定性均达到了动物源性食品中兽药残留的检测要求。同时,研究了磺胺类和喹诺酮类抗体与抗原的分子识别机制,建立了抗原-抗体结合的定量构效关系模型和互作虚拟模型,根据获得的相互作用力类型和作用关键位点,指导了喹诺酮类药物单链抗体的定点突变,获得的突变体对沙拉沙星和二氟沙星的亲和力提高了10倍。

项目成果

期刊论文数量(7)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(4)
专利数量(0)
Simultaneous Determination of 13 Fluoroquinolone and 22 Sulfonamide Residues in Milk by a Dual-Colorimetric Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
双比色酶联免疫吸附法同时测定牛奶中 13 种氟喹诺酮类药物和 22 种磺胺类药物残留
  • DOI:
    10.1021/ac303606h
  • 发表时间:
    2013-02-19
  • 期刊:
    ANALYTICAL CHEMISTRY
  • 影响因子:
    7.4
  • 作者:
    Jiang, Wenxiao;Wang, Zhanhui;Shen, Jianzhong
  • 通讯作者:
    Shen, Jianzhong
Selection of anti-sulfadimidine specific ScFvs from a hybridoma cell by eukaryotic ribosome display.
通过真核核糖体展示从杂交瘤细胞中选择抗磺胺二甲嘧啶特异性 ScFv
  • DOI:
    10.1371/journal.pone.0006427
  • 发表时间:
    2009-07-29
  • 期刊:
    PloS one
  • 影响因子:
    3.7
  • 作者:
    Qi Y;Wu C;Zhang S;Wang Z;Huang S;Dai L;Wang S;Xia L;Wen K;Cao X;Wu Y;Shen J
  • 通讯作者:
    Shen J
Investigation of antigen-antibody interactions of sulfonamides with a monoclonal antibody in a fluorescence polarization immunoassay using 3D-QSAR models.
使用 3D-QSAR 模型研究荧光偏振免疫测定中磺胺类药物与单克隆抗体的抗原抗体相互作用
  • DOI:
    10.3390/ijms13056334
  • 发表时间:
    2012
  • 期刊:
    International journal of molecular sciences
  • 影响因子:
    5.6
  • 作者:
    Wang Z;Kai Z;Beier RC;Shen J;Yang X
  • 通讯作者:
    Yang X
Heterologous structure of coating antigen on sensitivity of ELISA for sulfamethazine: evidence from molecular similarity analysis
包被抗原的异源结构对磺胺二甲嘧啶 ELISA 敏感性的影响:来自分子相似性分析的证据
  • DOI:
    10.1080/09540105.2010.533752
  • 发表时间:
    2011-03
  • 期刊:
    Food and Agricultural Immunology
  • 影响因子:
    3
  • 作者:
    Wang, Zhanhui;Zhang, Jing;Zhang, Suxia;Shen, Jianzhong
  • 通讯作者:
    Shen, Jianzhong

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课题项目:调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要:

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题,其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子,其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而,TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用,影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法,探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用,为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义,并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路:

科学问题:TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达?
前期研究:已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应,但其具体机制尚不明确。
研究创新点:本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线:包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术:TRIM2与病毒RNA的相互作用分析,IFN-β启动子活性检测。
实验模型:使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
      
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