CYR61对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞生物学行为影响及复方丹参的干预

类风湿关节炎（RA）是常见的风湿病，致残率高，发病作用靶点在滑膜。前期的工作已经证明了CYR61在RA滑膜、成纤维样滑膜细胞（FLS）的高表达。CYR61能促进肿瘤的增殖和侵袭性。CYR61的"多重"功能与RA-FLS生物学特征相似。前期实验显示在CYR61作用下FLS侵袭力要大于正常FLS。由此，我们首次提出CYR61基因对RA-FLS的增殖和侵袭力产生影响。RA属中医"痹证"，痹阻不通是痹证发病的病理核心。复方丹参是经典的活血化瘀药物，治疗RA疗效确切。前期研究发现复方丹参能抑制CIA大鼠滑膜细胞增殖和诱导其凋亡。因此，本项目拟用逆转录病毒转染、RNA干扰技术观察CYR61对RA-FLS增殖、凋亡和侵袭性影响及复方丹参的干预作用，旨在获得CYR61直接参与RA-FLS侵袭性的可靠证据及复方丹参的作用机制，为确立CYR61作为RA研究和治疗的新靶点及复方丹参治疗RA的应用提供科学依据。

本课题研究CYR61对于RA-FLS增殖、凋亡和侵袭力的生物学行为影响以及复方丹参对其过程的干预，旨在获得CYR61直接参与RA-FLS侵袭性的可靠证据及复方丹参的作用机制。本研究首先获取RA和正常人滑膜的活组织，然后进行分离和培养，获得纯化的FLS，并应用流式细胞仪对细胞表面标志物进行鉴定。然后进行CYR61慢病毒载体的包装和FLS转染，。同时应用RNAi技术，合成CYR61 siRNA瞬时转染RA-FLS；应用MTS法检测各组FLS增值率；应用Tunel法检测各组FLS凋亡率；应用Transwell法检测各组FLS侵袭能力，并应用ELISA检测各组细胞液中MMP-1,3，10,13水平；应用以上方法观察复方丹参对RA-FLS中CYR61基因和蛋白表达以及RA-FLS增殖、凋亡和侵袭力的干预作用。结果显示：滑膜细胞CD90的阳性率接近98%，获得了实验需要的FLS；转染实验结果显示，两组转染效率都在90%以上；。各组FLS增殖情况结果显示，第5天的FLS细胞增殖率与细胞CYR61的mRNA和蛋白水平均呈正相关（P<0.01）；FLS细胞凋亡率与细胞CYR61的mRNA和蛋白水平均呈负相关（P<0.01）；各组FLS侵袭能力结果显示，FLS细胞侵袭力与细胞CYR61的mRNA和蛋白水平均呈正相关（P<0.01）。MMP-3与CYR61表达水平和细胞侵袭力相关（P<0.05）；.本研究结果还显示，与正常RA-FLS和小剂量复方丹参比较，大剂量复方丹参能抑制RA-FLS增殖，促进其凋亡，并且具有明显抑制RA-FLS侵袭力（P<0.05），其作用接近甲氨蝶呤。结论：1..CYR61可能是通过促进RA-FLS增殖、抗凋亡达到滑膜增生，再通过增进RA-FLS表达MMP-3增强其侵袭力达到破坏关节软骨的作用；2.大剂量复方丹参能抑制RA-FLS增殖，促进其凋亡，并且抑制RA-FLS侵袭力，通过这些作用能够起到抑制RA滑膜增生和关节软骨破坏的作用。本研究发表论文4篇，其中SCI收录2篇。获得广东省科技奖励二等奖。培养博士后1名。

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