猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性变异株、经典株感染后宿主靶细胞差异表达基因的鉴定与功能分析

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
30901080
项目类别：
青年科学基金项目
资助金额：
19.0万
负责人：
安同庆
依托单位：
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
学科分类：
C1802.兽医病毒学
结题年份：
2012
批准年份：
2009
项目状态：
已结题
起止时间：
2010-01-01 至2012-12-31

项目参与者：
田志军；彭金美；肖燕；王瑶；张祎；陈家锃；
关键词：
高致病性猪蓝耳病病毒致病性差异表达基因宿主靶细胞消减杂交文库

项目摘要

自2006年至今，我国大面积流行着高致病性猪蓝耳病，较以往相比，其病原(PRRSV)的致病性显著增强，但目前对于增强的机制尚一无所知。在证实高致病性猪蓝耳病病毒特征性的缺失与致病性无关之后，从宿主机体对病毒的应答方面入手展开研究，是十分有效可行的。本研究选用高致病性变异株、经典株分别感染宿主靶细胞，构建不同致病性PRRSV感染后靶细胞的消减杂交文库，得到宿主靶细胞在不同致病性PRRSV感染后所产生的不同的基因表达谱。这些差异表达的基因是机体受不同致病性PRRSV诱发所表达的基因，是病毒致病的分子基础。差异表达基因经Southern-blot和Real-time PCR等方法鉴定后，进行基因功能的注释与分析。选取其中若干基因进行人为地干扰其表达，观察基因的表达上调或下调对PRRSV复制的影响，以及对宿主靶细胞内其他蛋白的影响。本研究结果将为PRRSV致病机制的研究提供线索与思路。

结项摘要

2006年以来，我国大面积流行着高致病性猪蓝耳病，与以往相比，其病原(HP-PRRSV)的致病性显著增强，但对其增强机制尚一无所知。在证实HP-PRRSV NSP2蛋白缺失与致病性无关之后，从宿主机体对病毒的应答方面入手展开研究，是十分有效可行的。本研究选用高致病性变异株感染宿主靶细胞，利用抑制消减杂交技术，分析宿主靶细胞在PRRSV 感染后所产生的不同的基因表达谱。差异表达基因经Southern-blot鉴定后，进行基因功能的注释与分析。主要有3类基因发生了变化，即代谢酶类基因、免疫相关基因和细胞信号类基因发生了变化，三者累计约占差异基因总数的75%。选取其中MX1、HSP70以及IL-8等基因进行Western blot、ELISA和Real-time PCR验证。在此基础上，利用2D-DIGE结合质谱技术，分析高致病性PRRSV、经典PRRSV分别感染细胞的差异表达蛋白，其中与经典株相比，高致病性PRRSV感染后细胞中的膜联蛋白Annexin表达升高。通过对差异蛋白可能参与的信号通路进行分析，为今后深入研究PRRSV致病机制提供线索与思路。在青年基金的资助下，已毕业研究生3名，在读研究生2名，1人获得中国免疫学青年学者奖，发表SCI论文4篇。