干扰素对HBV应答的关键差异蛋白及其调控方式

There are approximately 93,000 thousands hepatitis B virus (HBV) carriers in China. Chronic HBV infection increases the risk of liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma, and heavily threatened people’s health. To date, two classes of antiviral drugs have been approved by the Food and Drug Administration for the treatment of hepatitis B, immunomodulators (interferon-α and pegylated-interferon-α) and nucleos(t)ide analogs such as lamivudine. Interferon (IFN) is one of the first-line anti-HBV drugs, while its therapeutical effect is influenced by many factors. The action mechanism of different response of interferon has not been fully elucidated. In our preliminary studies, the possible mechanism was studied at the cell levels, and two-dimensional electrophoresis has been carried out successfully. In this project, with clinical samples, the key differential expression proteins and their regulators of HBV in response to interferon will be studied using proteomics technique, and the interaction among the key differential expression proteins, IFN, and HBV replication and expression will be further explored, hence the internal mechanisms of the different responses of IFN on HBV will be revealed. These results will not only provide valuable information for enhancing antiviral efficiency of IFN in clinic, but also may help and improve new antiviral drugs development.

我国有9300万乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus, HBV）携带者，慢性HBV感染与肝硬化、肝癌有显著相关性，严重威胁人类身体健康。美国食品药品监督管理局批准使用的抗HBV药物包括免疫调节类药物（干扰素和聚乙二醇干扰素）及核苷类似物药物如拉米夫定等。干扰素（Interferon，IFN）作为首选的抗HBV药物之一，其抗病毒效果与许多因素有关，其治疗应答差异的内在机制尚未完全阐明。申请者在前期工作中，已在细胞水平上对HBV引起IFN治疗应答差异的机制进行了初步研究，并顺利开展蛋白质双向电泳实验。本项目拟在此基础上，采用临床样本，在蛋白质组学角度研究IFN治疗应答的关键差异蛋白及其调控方式，并进一步探讨关键差异蛋白与IFN、HBV复制表达的相互关系，以揭示由IFN对HBV应答差异的内在机制。这些结果可为临床上增强IFN的抗病毒效果以及促进新的抗病毒药物研发提供重要参考。

全世界大约有3.5亿人为乙型肝炎病毒（HBV）携带者，在中国则有9300万，每年有50万人死于与HBV感染有关的疾病，给人民健康带来严重威胁。慢性HBV感染与肝炎、肝硬化和肝癌有显著的相关性，是肝癌发生的主要因素之一。干扰素（IFN）是目前最有效的抗HBV治疗的一线药物，然而70%的慢性乙肝患者对IFN治疗并不敏感。在本研究中，我们希望寻找到可能影响IFN抗HBV效应的相关分子，并阐明其作用通路及调控方式，然后通过调控这些分子，提高IFN的抗HBV效应。本研究前期结果显示，糖蛋白gp96与HBV的复制及IFN的抗HBV效应相关。实验结果表明，HBV促进gp96的表达；而gp96能够促进HBV的复制，而IFN可上调gp96。由于IFN具有抗HBV活性，由IFN引起的gp96上调在IFN的抗病毒活性中则产生了负调控作用。通过敲降gp96能够显著增强IFN的抗HBV效应。虽然gp96通过Toll样受体（TLR）和抗原呈递诱发的天然免疫和获得性免疫在活化T细胞反应中发挥重要作用，然而由gp96介导TLR活化以及其在相关T细胞活化中发挥作用仍然缺乏直接的证据。在本研究中，我们报道了TLR结合域发生突变后的gp96蛋白不能活化巨噬细胞，但是不影响抗原肽的呈递功能。另外，当该TLR结合域发生突变后，gp96的肽特异性T细胞反应以及gp96诱导的抗肿瘤T细胞免疫都受到严重影响。这些结果表明gp96与TLR的相互作用在诱发T细胞免疫中的重要作用，并为深入研究连接gp96介导的天然免疫及获得性免疫的提供了分子基础。目前越来越多的研究显示，长非编码RNA（lncRNA）在病毒感染及其引发的相关疾病中发挥重要作用，且可能影响IFN的抗病毒效果。然而，目前已报道的lncRNA中，仅有很少一部分被证实与HBV感染及其引发的肝癌相关，并且仅一篇报道提出1个lncRNA对IFN的抗HBV效果相关。在本研究中，我们系统总结了lncRNA在HBV感染引发肝癌中的功能、靶点及作用机制。其次，我们采用芯片初步筛选在HBV感染、IFN处理后发生差异表达的lncRNA并对其进行了GO和pathway分析。目前正对这些发生差异表达的lncRNA进行验证，并对其可能的功能及作用机制进行进一步研究。

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