Tm细胞向Treg细胞分化异常在慢性肾衰者免疫紊乱中作用的初步研究

维持性血透（MHD）患者调节性T细胞（Treg）数量显著减少，且与血清尿素氮及肌酐水平无显著相关，其机制尚未明确。传统的观点认为，胸腺功能障碍是MHD患者体内CD4+T细胞及Treg数量减少的主要原因，然而部分MHD患者胸腺功能并无异常。最近研究表明，人类记忆性T细胞（Tm）能在体内迅速向Treg分化。我们的研究也发现，MHD患者接种乙肝表面抗原后，中央记忆型CD4+Tcm细胞反应显著延迟，IL-2+HBsAg特异性效应型Tm只有对照组的6.7%。本研究试图以MHD患者及慢性肾功能不全（CRF）小鼠CD4+Tcm细胞为研究对象，采用氧化低密度脂蛋白刺激、RNA干扰，以及中和抗体阻断等进行体内外干预，并检测干预后CD4+Tcm增殖、分化及凋亡情况。本课题旨在阐明CD4+Tcm在MHD及CRF患者Treg细胞免疫紊乱中的作用及其机制，以期为改善CRF患者细胞免疫功能提供新的思路。

本研究的目的是阐明CD4+ 记忆性T细胞分化为调节性T细胞这一过程是否对慢性肾脏病患者的免疫缺陷有所影响，并明确氧化低密度脂蛋白是否影响CD4+ 记忆性T细胞、调节性T细胞的细胞凋亡过程。本研究采用流式细胞术测定患者的CD4+ 记忆性T细胞、调节性T细胞。而细胞凋亡则由流式细胞术检测并用免疫印迹法确定。结果发现：1、各组患者血清oxLDL检测均采用mAb-4E6-based ELISA kit试剂盒，首先建立标准曲线，常规血液透析患者oxLDL血清浓度显著高于CKD4期患者(P < 0.001)；而CKD4期患者血清oxLDL浓度又显著高于健康人群(P < 0.001)；2、血液透析组（HD组）患者CD4+T细胞经植物血凝素（PHA）刺激后，其增殖效率(2889 ± 213 cpm)显著低于CKD4组(4156 ± 307 cpm, P < 0.001)；为了探讨oxLDL对于CD4+中央记忆性T细胞（表型CD4+CD45RO+CCR7+）分化增殖的影响，CD4+中央记忆性T细胞分别与PHA和oxLDL进行培养72 h；oxLDL显著抑制了CD4+中央记忆性T细胞的增殖；3、在PHA刺激下，CD4+CD45RO+CCR7+中央记忆性T细胞能向CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞定向分化，100 ug/ml oxLDL可显著诱导健康人群、CKD4期及HD患者中央记忆性T细胞来源的调节性T细胞（Tregs）凋亡(P < 0.001)。One-way ANOVA分析提示，HD患者与CKD4期患者Tregs凋亡率显著区别(P < 0.001)；与CKD4期患者相比，流式细胞术检测提示HD患者CD4+中央记忆性T细胞（Tcm）表面表达更高比例的Fas凋亡蛋白(P < 0.001)。以上结果同时被Western Blotting分析实验所证实。因而可以推断，以上结果强烈提示CD4+中央记忆性T细胞与Tregs细胞凋亡是由oxLDL所诱导。因而，CD4+ 记忆性T细胞分化为调节性T细胞过程的紊乱在慢性肾脏病患者免疫缺陷的发生中起一定作用，而且氧化低密度脂蛋白诱导CD4+ 记忆性T细胞形成调节性T细胞这一过程的细胞凋亡，在今后的研究中还需要扩大样本量来证实这项结论。. 通过本研究，已申请并获批专利2项，培养研究生3人，发表SCI论文1篇，参加国际会议1次。

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