环状RNA circ_101000诱导USP7蛋白乙酰化的分子机制及其在促进HCC细胞生长中的作用

The persistent growth of HCC cells is correlated with the malignant progression and poor prognosis of HCC. However, the related mechanism is still not well elucidated. As a member of the non-coding RNAs, circRNAs play an important role in regulating the growth of tumor cells. We for the first time found that circ-101000 is up-regulated in HCC tissues and circ-101000 promotes the growth of HCC cells via increasing the expression of Cyclin A2. Moreover, we observed that circ-101000 enhances the acetylation of USP7 protein, promoting the formation of USP7/PHF8 protein complex, leading to the upregulation of Cyclin A2. Furthermore, miR-132/P300 axis may be involved in circ-101000 mediated acetylation of USP7 protein. Combined with the above novel findings, we hypothesized that circ-101000 may promote the growth of HCC cells via the following pathway “absorbing miR-132→desuppress the translation inhibition of P300 induced by miR-132→elevating protein level of P300→promoting acetylation of USP7→promoting the formation of USP7/PHF8 protein complex→inhibition ubiquitin-dependent degradation of PHF8→enhancing the expression of Cyclin A2”. We plan to elucidate the mechanisms by which circ_101000 promots the growth of HCC cells, which may provide new scientific evidence for anti-HCC strategy targeting circ_101000 and its related signaling pathway.

肝细胞癌（HCC）细胞的持续生长与HCC的恶性进展和不良预后密切相关，但其调控机制仍不十分清楚。作为非编码RNA中的一员，环状RNA在调控肿瘤生长中具有重要作用。我们前期发现circ-101000在HCC组织中高表达并可通过上调Cyclin A2的表达水平从而促进HCC细胞生长；circ-101000显著促进USP7蛋白乙酰化；miR-132/P300轴可能介导circ-101000诱导的USP7蛋白乙酰化。据此提出假设：circ_101000可能通过“吸附miR-132→减弱miR-132对P300的翻译抑制→上调P300蛋白水平→促进USP7蛋白乙酰化→促进USP7-PHF8蛋白复合体形成→抑制PHF8泛素化降解→增强Cyclin A2表达”从而促进HCC细胞生长。本项目将阐明上述通路形成的机制，为探索以circ_101000及其介导的信号通路为靶标的抗HCC新策略提供科学依据。

肝癌是临床上常见且预后较差的消化系统恶性肿瘤，除手术、放化疗外，靶向治疗也是其重要的治疗手段。多激酶抑制剂索拉菲尼作为FDA最早批准的用于晚期肝癌靶向治疗的药物，其治疗效果仍不十分理想，而肿瘤耐药是降低索拉菲尼疗效的重要原因。因此，探索索拉菲尼耐药机制无疑将有助于发现新的索拉菲尼增敏策略。去泛素化酶USP7作为促癌基因，与多种肿瘤的发生、发展及耐药密切相关，但其是否参与肝癌细胞对索拉菲尼的抵抗目前仍不清楚。在本项目中，我们发现：过表达USP7显著降低索拉菲尼对肝癌细胞的杀伤效应而沉默USP7可显著增强索拉菲尼对肝癌细胞的杀伤效应。我们进一步探索发现氧合黄连素（Oxyberberine, OBB）以及黄连素（berberine，BBR）可通过抑制USP7的表达从增加肝癌细胞对索拉菲尼的敏感性。机制研究发现OBB通过抑制NOTCH1的活化从而抑制USP7的表达，进而促进c-Myc的泛素化降解，最终增强索拉菲尼对肝癌细胞的杀伤效应。综上所述，我们证实了OBB可通过NOTCH1-USP7-c-Myc通路增强索拉菲尼对肝癌细胞的杀伤效应，为探索索拉菲尼增敏剂在临床肝癌治疗中的应用提供了实验依据和理论基础。. 此外，我们还发现：自噬相关蛋白ATG4B的乙酰化/去乙酰化动态变化在自噬调节过程中的作用。具体来讲，在基础条件下，EP300介导的ATG4B的乙酰化和SIRT2介导的ATG4B去乙酰化之间维持动态平衡，从而维持基础水平的自噬。在营养缺乏时，ATG4B乙酰化和去乙酰化之间的平衡被打破，从而诱导细胞自噬。营养缺乏一方面通过下调EP300，另一方面通过抑制CCNE-CDK2蛋白复合物诱导的SIRT2 Ser331磷酸化导致SIRT2活化，从而促进ATG4B K39的脱乙酰化，最终导致ATG4B活性升高和细胞自噬。. 就以上有关研究结果已发表科研论文2篇，另外1篇论文已投稿，正在审稿中。.

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