DNA甲基化的电化学检测和特异位点预测研究

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基本信息

  • 批准号：
    81171666
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    58.0万
  • 负责人：
    邹小勇
  • 依托单位：
    中山大学
  • 学科分类：
    H2606.检验医学研究新技术与新方法
  • 结题年份：
    2015
  • 批准年份：
    2011
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2012-01-01 至2015-12-31

项目摘要

本项目以DNA甲基化的电化学检测及特异位点预测为研究目的。建立DNA甲基化/去甲基化的表观遗传学模型，包括：基因启动子区域DNA片段的构建，以及DNA片段的CpG酶促甲基化等。建立DNA甲基化/去甲基化的电化学检测方法，包括：基因组DNA整体甲基化水平的检测，特异性位点甲基化状态的电化学识别，肿瘤抑制基因甲基化突变的电化学控制及其在肿瘤生长过程中的作用，以及DNA多位点甲基化水平的电化学阵列芯片的研制。研究改进型支持向量机及联用技术预测DNA新甲基化位点方法。以已知基因INK4A (p16) 启动子区域CpG岛为研究对象，考察并完善建立的方法。对未知的甲基化状态进行预测和检测，与甲基化特异性PCR（MSP）或定量MSP进行对照。跟踪DNA甲基化/去甲基化的变化过程，为药物快速筛选及临床应用提供依据。本课题的研究必将丰富临床检验新技术，在表观遗传学和临床医学等方面具有重要理论意义和实用价值。

结项摘要

本课题以DNA 甲基化的电化学检测及模式预测为研究目的，取得以下主要研究成果：建立了一种免标记识别p53肿瘤抑制基因甲基化状态的方法，该方法无需PCR扩增、限制性内切酶的切割以及放射性标记，具有快速方便的特点。建立了基于连接酶的p53肿瘤抑制基因多特异甲基化位点的电化学检测，可方便实现对p53肿瘤抑制基因多特异甲基化位点的高灵敏检测，无需PCR和限制性内切酶。建立DNA 特异位点甲基化的免标记电化学检测方法，该方法可对待测 DNA 中特异位点的甲基化水平进行灵敏检测，无需 PCR 扩增和亚硫酸盐处理等，为 DNA 特异位点甲基化的电化学检测提供新方法。建立了一种基于嘌呤和嘧啶碱基化学计量关系的DNA甲基化电化学检测方法，该方法已成功应用于实际样品中DNA甲基化程度的检测，结果令人满意。建立了人类DNA序列甲基化位点及其甲基化程度的预测方法，所建立的方法能实现对DNA甲基化的有效预测。已发表学术论文20篇，申请国家发明专利6件。本课题的研究必将丰富临床检验新技术，在表观遗传学和临床医学等方面具有重要理论意义和实用价值。

项目成果

期刊论文数量（24）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
Sensitive electrochemical analysis of BRAF V600E mutation based on an amplification-refractory mutation system coupled with multienzyme functionalized Fe3O4/Au nanoparticles (vol 43, pg 257, 2013)
基于扩增阻滞突变系统与多酶功能化 Fe3O4/Au 纳米颗粒相结合的 BRAF V600E 突变的灵敏电化学分析（第 43 卷，第 257 页，2013 年）
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    Biosensors and Bioelectronics
  • 影响因子：
    12.6
  • 作者：
    Cai, Zhen;Wang, Qian;Yan, Xiaohui;Zheng, Lei
  • 通讯作者：
    Zheng, Lei
Identification of potential host proteins for influenza A virus based on topological and biological characteristics by proteome-wide network approach
基于拓扑和生物学特征的全蛋白质组网络方法鉴定甲型流感病毒的潜在宿主蛋白
  • DOI：
    10.1016/j.jprot.2012.02.034
  • 发表时间：
    2012-04-18
  • 期刊：
    JOURNAL OF PROTEOMICS
  • 影响因子：
    3.3
  • 作者：
    Lai, Yan-Hua;Li, Zhan-Chao;Zou, Xiao-Yong
  • 通讯作者：
    Zou, Xiao-Yong
Picomolar level profiling of the methylation status of the p53 tumor suppressor gene by a label-free electrochemical biosensor
通过无标记电化学生物传感器对 p53 肿瘤抑制基因的甲基化状态进行皮摩尔水平分析
  • DOI：
    10.1039/c2cc35615e
  • 发表时间：
    2012-01-01
  • 期刊：
    CHEMICAL COMMUNICATIONS
  • 影响因子：
    4.9
  • 作者：
    Wang, Po;Wu, Hai;Zou, Xiaoyong
  • 通讯作者：
    Zou, Xiaoyong
Electrochemical evaluation of DNA methylation level based on the stoichiometric relationship between purine and pyrimidine bases
基于嘌呤和嘧啶碱基化学计量关系的DNA甲基化水平的电化学评估
  • DOI：
    10.1016/j.bios.2013.01.057
  • 发表时间：
    2013-07-15
  • 期刊：
    BIOSENSORS & BIOELECTRONICS
  • 影响因子：
    12.6
  • 作者：
    Wang, Po;Chen, Hanbin;Zou, Xiaoyong
  • 通讯作者：
    Zou, Xiaoyong
A label-free electrochemical assay for quantification of gene-specific methylation in a nucleic acid sequence
用于定量核酸序列中基因特异性甲基化的无标记电化学测定
  • DOI：
    10.1039/c2cc15398j
  • 发表时间：
    2012-01-01
  • 期刊：
    CHEMICAL COMMUNICATIONS
  • 影响因子：
    4.9
  • 作者：
    Dai, Zong;Hu, Xiao;Zou, Xiaoyong
  • 通讯作者：
    Zou, Xiaoyong

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  • 作者：
    李占潮;戴宗;邹小勇
  • 通讯作者：
    邹小勇

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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