联合MuRF-1与FOXO3a基因治疗延缓失神经肌萎缩的实验研究

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
81000805
项目类别：
青年科学基金项目
资助金额：
20.0万
负责人：
冯勇
依托单位：
山西医科大学
学科分类：
H0604.骨、关节、软组织损伤与修复
结题年份：
2013
批准年份：
2010
项目状态：
已结题
起止时间：
2011-01-01 至2013-12-31

项目参与者：
张磊；常文凯；贾英伟；李刚；李文斌；高宏飞；吴启平；
关键词：
RNA干扰失神经肌萎缩 FOXO MuRF1

项目摘要

失神经肌萎缩的治疗是周围神经领域亟待解决的难题，失神经支配早期肌肉会出现快速萎缩，众多研究已经证实：蛋白降解的相关信号通路被大量激活，蛋白降解远远超过了蛋白合成，在此过程中，一些基因发挥了关键性作用，采取措施调控这些基因可以在一定程度上延缓失神经肌萎缩的进程；目前有关此方面基因治疗的报道较多，但是多为单基因治疗，且总体疗效有限，鉴于肌萎缩的发生受多因素、多基因调控的快速发展的主动过程，联合基因治疗受到越来越多的关注，被认为是未来延缓肌萎缩的重要方向；本课题尝试采用联合基因治疗的方法，通过基因技术特异性地阻断与骨骼肌萎缩密切相关的MuRF1及FOXO因子的入核通路，这样就阻断了两个重要的蛋白水解通路FOXOS/MAFbx信号通路与NF-κB/ MuRF1信号通路，借此抑制失神经后骨骼肌中蛋白的高分解代谢,以进一步提高失神经骨骼肌萎缩的疗效。

结项摘要

失神经骨骼肌萎缩的防治一直是医学界的难题。以往的研究表明，失神经肌萎缩是由多基因参与调控的快速发展的主动过程，本项目从基因与信号转导通路角度来剖析其分子机制，采用RNA干扰介导的的基因治疗对肌萎缩信号通路中关键基因进行靶向干预，以此来探讨延缓失神经肌萎缩的可行性。首先，在信号转导通路P38/MAFbx与NF-κB/ MuRF1中选择了两个与骨骼肌萎缩密切相关的基因FOXO3a和MuRF1作为研究对象，证实了两基因在失神经后早期表达明显上调且变化规律不同，表明了它们在骨骼肌早期的快速萎缩中发挥着不同的作用。然后，分别设计、构建和合成了两基因相对应的siRNA重组质粒，经酶切鉴定与测序分析正确；第三，将两基因的siRNA重组质粒单独或者联合转染大鼠成肌细胞系L6，对其进行了验证，筛选出了可有效抑制FOXO3a和MuRF1表达的干扰序列，同时证实联合两个基因转染与单基因转染在抑制效率方面差异无统计学意义，表明FOXO3a和MuRF1两基因分别属于不同信号转导通路，两者之间不存在相互作用，联合两基因共同转染是否延缓在体失神经肌萎缩正在研究中，该项目的实施为动物实验与后续研究奠定了良好的基础，为失神经肌萎的治疗提供了新的思路。