水产品性激素多残留分析样品的亚临界R134a前处理技术研究

随着色谱、质谱、免疫分析及联用技术不断优化和日趋完善，水产品药残的检测工作已逐渐简化，而样品前处理技术越来越成为药残分析过程中的关键。本课题拟采用亚临界R134a萃取技术，在前期预备实验成功的基础上，通过对己烯雌酚在亚临界R134a多元体系中溶解度的测定，得到和积累其在亚临界R134a中的溶解度基础数据，以及共溶剂、共溶质和反胶团对其溶解度的影响情况，然后通过对亚临界R134a萃取水产品残留激素的工艺、技术和方法的研究，建立起高效、快速、绿色环保的水产品样品性激素多残留分析的前处理新技术。本课题的研究不但有助于推动和促进复杂生物样品前处理新方法、新技术的发展，而且对保证我国水产品质量安全和消费者身体健康、促进水产品出口、保持渔业经济可持续发展具有重要的意义。本项目首次提出利用亚临界R134a萃取技术作为水产品性激素多残留分析样品前处理技术的研究。

本项目采用亚临界R134a萃取技术作为水产品激素残留检测的新型样品前处理技术，取得的主要研究结果如下：.1. 用正交试验优化了亚临界R134a萃取鱼肉中丙酸睾酮残留，甲醇收集液用石油醚脱脂纯化，然后用高效液相色谱仪检测。得到最佳的实验条件：萃取压力14 MPa，萃取温度23 ℃，R134a 流量1.0 L /min（标态），静态萃取30 min，动态萃取40 min，共溶剂甲醇添加量2 mL，收集液为甲醇。在最优条件下，方法回收率大于90%、相对标准偏差（RSD）小于5%。.2. 用响应曲面优化了亚临界R134a萃取鱼肉中甲基睾酮残留，甲醇收集液用C18固相萃取小柱纯化，然后用高效液相色谱仪检测。得到最佳的实验条件：萃取压力5MPa、萃取温度31℃、共溶剂甲醇用量3.35mL、静态萃取30 min，动态萃取40 min，R134a流量1 L/min。在最优实验条件下，甲基睾酮的加标回收率均大于90%，RSD小于3%。.3. 用响应曲面优化了亚临界R134a萃取鱼肉中醋酸甲羟孕酮残留，甲醇收集液用C18固相萃取小柱纯化，然后用高效液相色谱仪检测。得到最佳的实验条件：萃取压力3MPa、萃取温度25℃、共溶剂甲醇用量6mL、静态萃取30 min，动态萃取40 min，R134a流量1 L/min。在最优实验条件下，甲基睾酮的加标回收率均大于95%，RSD小于5%。.（4）利用亚临界R134a萃取技术作为样品前处理技术，建立了鱼肉中甲基睾酮、丙酸睾酮、雌三醇、醋酸甲羟孕酮、β-雌二醇乙酸酯及己烯雌酚共六种性激素残留的气相色谱-质谱（GC-MS）分析方法。样品中的药物经过亚临界R134a萃取后，先进行冷冻过滤去脂，然后通过C18和NH2固相萃取小柱净化，最后经七氟丁酸酐衍生后用GC-MS进行定性定量分析。亚临界R134a萃取6种性激素的最佳条件为：萃取压力4MPa，萃取温度30℃，夹带剂用量6mL。在此条件下，六种性激素在5-1000μg/L 浓度范围内线性关系良好，相关系数均大于0.99；检出限为0.2-1μg/kg(S/N=3)。在1,5,10μg/kg三种浓度添加水平下，六种激素的平均回收率为70.5%-103.6%，相对标准偏差（RSD）为 2.1%-12.5%。用本方法进行实际样品检测时，在一份样品中成功检出己烯雌酚残留，残留量为14.6μg/kg。.

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