原发性胆汁性肝硬化患者T细胞受体CDR3免疫组库与谱系漂移机制研究

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
81172839
项目类别：
面上项目
资助金额：
14.0万
负责人：
刘海英
依托单位：
广州医科大学
学科分类：
H1107.自身免疫性疾病
结题年份：
2012
批准年份：
2011
项目状态：
已结题
起止时间：
2012-01-01 至2012-12-31

项目参与者：
鲍俊杰；黄永兰；曾兰兰；刘云锋；辜少玲；赵霞；高飞；陈小娟；龚四堂；
关键词：
T细胞受体(TCR)多重PCR 互补决定区3（CDR3）免疫组库原发性胆汁性肝硬化

项目摘要

T细胞在原发性胆汁性肝硬化自身免疫介导的致病过程中举足轻重，由其主导的病理性免疫应答机制至今未明。T细胞受体（TCR）是T细胞活化、识别HLA/抗原肽复合物并与之结合而发挥杀伤毒性的关键元件，其中可变区互补决定区3（CDR3）为抗原结合位点，亦是T细胞特异免疫应答的特征标志。本项目拟在前期对该病的抗原特异性T细胞抗原表位及免疫功能研究的基础上，利用新近发展的扩增子救援多重PCR与高通量测序技术半定量扩增、测定患者肝组织浸润T细胞TCR Vα、Vβ链所有CDR3基因序列，以生物信息学分析基因重排、建立TCR免疫组库,研究T细胞CDR3优势序列及氨基酸取用特点，找到疾病特征TCR谱，同时从免疫遗传、自身抗原驱动两方面阐明原发性胆汁性肝硬化T细胞免疫应答特点与TCR谱系漂移的发生机制，并探讨TCR谱系漂移监测的临床意义，为该病预防、早期干预、疗效监测乃至免疫治疗研究提供新的科学依据。

结项摘要

【摘要】目的：建立原发性胆汁性肝硬化患者CD8+ T细胞TCR Vβ链的CDR3免疫组库，探讨其TCR Vβ链的CDR3基因序列的多样性的改变，找到可能存在的优势取用序列,并探讨其中遗传、抗原驱动的可能机制，进一步揭示PBC的细胞免疫机制，为免疫治疗研究提供基础。方法：用新近发展的ARM-PCR技术和高通量测序技术半定量扩增、测定24例PBC患者和10例对照外周血CD8+ T细胞TCR Vβ链的CDR3基因序列，结合临床资料（临床分期、HLA分型、自身抗体水平等）对测序结果进行生物信息学分析。结果：通过Illumina测序平台得到大约7千万个有效的CDR3序列，其中包含约26万个不同的CDR3序列。PBC患者外周血CD8+ T细胞TCR Vβ链的CDR3序列多样性(D50=1.4)与正常组(D50=2.7)比较是减少的，减少程度与疾病的临床分期正相关，与自身抗体尤其是gp210抗体负相关。不同PBC患者间存在共有的优势取用序列。随着疾病的进展，不同PBC患者间的CDR3共有序列复杂性增多，且共有序列测得的频次也显著增高（“ATRQ****T”在不同Ⅲ期患者间测得的共有频次可达两万多次，“AS*FL**TD**Y” 在不同Ⅲ期患者间测得的共有频次可达一万多次）。不过，未发现HLA-Ⅰ类（A、B位点）分型与PBC患者外周血CD8+ T细胞TCR Vβ链的CDR3多样性相关，且相同HLA-Ⅰ类（A、B位点）分型的PBC患者间未发现特有的高频次的共有序列。结论：本研究成功建立了原发性胆汁性肝硬化患者CD8+ T细胞TCR Vβ链的CDR3免疫组库。PBC患者外周血CD8+ T细胞TCR Vβ链的CDR3序列多样性的变化与疾病分期和特异性自身抗体相关，其优势取用序列的复杂性及频次与疾病进展密切相关，而与HLA分型不相关。PBC患者外周血CD8+ T细胞TCR Vβ链的CDR3序列多样性的减少及优势取用序列的确定，在提示PBC患者外周血中存在CD8+ T细胞的大量克隆性扩增的同时，进一步揭示了PBC患者的细胞免疫机制，为特异性T细胞免疫治疗研究提供了基础。