新候选circRNA与miR-323-3p或功能蛋白DKK1互作调控子痫前期滋养细胞功能的机制研究

Hsa_circ_0007121,a novel circular RNA(circRNA) screened by high throughput RNA sequencing in our previous study, has been validated downregulated in placenta of preeclampsia(PE) and this dysregulation could be tested from maternal peripheral blood samples obtained at 14-18 weeks of gestation. These results revealed that hsa_circ_0007121 might participate in pathogenesis of PE in the early stage. Although functions of this circRNA have not been reported so far, based on our previous research, we hypothesized that hsa_circ_0007121 could induce pathogenesis of PE as a new oxidative stress sensor through two pathways: sponging miR-323-3p and/or interacting with Dickkopf-1 protein to regulate β-catenin and causing dysfunctions of trophoblasts finally. We will systematically investigate pathogenesis networks of hsa_circ_0007121 participating in PE through series experiments based on cell, tissue and animal levels using in vitro(primary extravillous trophoblast and villous explants) and in the vivo models(eNOS knock-out pregnancy mice) established previously. Besides, a prospective cohort study of PE and mathematical model will be performed to evaluate the predictive and prognosis estimation efficiency of hsa_circ_0007121, and identify new intervention targets for early prediction and prevention of preeclampsia, expectantly.

hsa_circ_0007121是我们前期通过高通量RNA测序筛选出的新环状RNA，已证实其在子痫前期（PE）胎盘组织中表达下调，且此种下调在PE孕妇妊娠14-18周的外周血中即可检出，提示其参与PE早期发病。由于其功能未知，本项目通过系列研究，提出hsa_circ_0007121这一新的氧化应激感受器参与PE发病的可能途径：通过海绵吸附miR-323-3p靶向调控β-catenin基因；或与功能蛋白Dickkopf-1互作，最终导致滋养细胞生物学功能损伤。本项目拟沿用已构建的PE体外研究模型（原代EVT和绒毛外植体）和eNOS基因敲除孕鼠模型，从细胞-组织-动物三个层次揭示以hsa_circ_0007121为核心的PE早期病因学网络；同时依托前瞻性PE妊娠队列，结合数学建模评估hsa_circ_0007121作为PE早期预测及预后判定标志物的效能，以期为PE早期预测和防治提供新的靶点。

circ_0007121是我们前期通过高通量RNA测序筛选出的新环状RNA，已证实其在子痫前期（PE）胎盘组织中表达下调，且此种下调在PE孕妇妊娠14-18周的外周血中即可检出。本项目通过系列研究，提出circ_0007121这一新的氧化应激感受器参与PE发病的可能途径：通过海绵吸附miR-323-3p靶向调控β-catenin基因，最终导致滋养细胞生物学功能损伤。. 本研究为证实这一设想，首先我们在扩大样本量的基础上，检测了早、中、晚期妊娠和子痫前期患者胎盘组织中circ_0007121的表达情况。结果显示circ_0007121在原代滋养细胞及HTR8/SVneo滋养细胞系胞浆中均有表达。接着，我们利用慢病毒转染构建了能过表达circ_0007121的滋养细胞株，结果表明过表达circ_0007121可提高滋养细胞的侵袭能力，但并不影响其增殖和凋亡能力。进一步的，我们证明了miR-323-3p为circ_0007121的下游直接靶标。随后我们改变通路各个环节后进行了一系列功能挽救实验，在体外证实了circ_0007121通过海绵吸附miR-323-3p后调控β-catenin的表达从而损伤滋养细胞功能的病因学网络；最后我们检测到，来自子痫前期孕妇中孕期外周血浆中的circ_0007121表达水平显著偏低，并表现出了较好的预测效能，有望进行成果转化。综上所述，circ_0007121通过海绵吸附miR-323-3p调控β-catenin的表达调控滋养细胞的侵袭能力，从而参与子痫前期的发病。. 本研究为子痫前期的机制研究提供重要的思路和理论依据，其研究成果——检测母体中孕期外周血中circ_0007121的浓度可有望用于开发疾病的早期预测试剂盒。本项研究所有内容按原定计划执行，项目资助发表SCI文章11篇，中文论著3篇。培养围产医学硕士研究生1名，已取得硕士学位；培养围产医学博士研究生3名，均已取得博士学位。项目经费基本按预算合理使用，剩余经费将继续用于本项目的研究。

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