环形泰勒虫感染对树突状细胞抗原递呈功能及活化淋巴细胞能力的影响

Theileria (including Theileria annulata and Theileria parva) is the only species of eukaryote could lead the infected mammalian cells to immortalization. From the publications, T. annulata could infect many immune cells including B cells, macrophages and dendritic cells. The infection of T. annulata induced uncontrolled proliferation of the cells which is like cancer cells did. In addition, some functional molecules from T. annulata could impair a number of host pathways leading to the changes of the phenotype and functions of the cells. Up to doday, most of works were about the effect of T. annulata on the functions of B cells and macrophages. Recently, one study shows dendritic cells could transform with T. annulata and became continuously proliferation. All theileria transformed dendritic cell lines were expressed MHC-II, but the expression level was variable between different cell lines, whether these differences are related to the capacity of antigen present still not clear. The main objective of this project is firstly to establish a monoclonal cell line of T. annulata infected dendritic cells and secondly to study the effect of T. annulata infection on the ability of DC to present antigen by using fluorescence-activated cell sorting (FACS). Some antigen presenting relative factors such as CD86, MHC I and II will be analyzed by using fluorescence real time PCR and enzyme-linked immuno sorbent assay (ELISA) on nucleotide and protein level. In addition, the immune regulatory effect of transformed DC on T cells and B cells will be preliminary test. The expected results would supply more evidences for understanding the pathogenic and immunomechanism of T. annulata.

泰勒虫（包括环形泰勒虫和小泰勒虫）是截止目前发现的、唯一一类能够使宿主细胞发生永生化的真核生物。实验证明，环形泰勒虫可感染牛的B细胞、巨噬细胞和树突状细胞，使细胞发生永生化、并获得类似肿瘤细胞一样的无限传代的能力的同时，还可通过分泌功能分子影响寄生细胞的多种信号通路，并使细胞的表型和功能发生改变。但目前研究者的注意力主要集中于B细胞和巨噬细胞。近期研究发现，环形泰勒虫也可以感染树突状细胞，并使其表面分子MHC II表达发生改变，但这种变化是否对其抗原递呈功能产生影响仍不清楚。本研究欲通过环形泰勒虫子孢子体外感染树突状细胞，建立单一克隆的细胞系，通过体外检测方法，对树突状细胞感染环形泰勒虫后的抗原递呈能力进行研究，并对抗原递呈功能相关分子的表达变化进行分析，初步研究感染细胞对T细胞和B细胞免疫调节的影响，为系统开展环形泰勒虫致病机制和免疫机理的研究提供新的线索。

项目背景.泰勒虫是截止目前发现的、唯一一类能够使宿主细胞发生永生化的真核生物。实验证明，环形泰勒虫可感染牛的B细胞、巨噬细胞和树突状细胞，使细胞发生永生化、并获得类似肿瘤细胞一样的无限传代的能力的同时，还可通过分泌功能分子影响寄生细胞的多种信号通路，并使细胞的表型和功能发生改变。但目前研究者的注意力主要集中于B细胞和巨噬细胞。近期研究发现，环形泰勒虫也可以感染树突状细胞，并使其表面分子MHC II表达发生改变，但这种变化是否对其抗原递呈功能产生影响仍不清楚。本研究欲通过环形泰勒虫子孢子体外感染树突状细胞，建立单一克隆的细胞系，通过体外检测方法，对树突状细胞感染环形泰勒虫后的抗原递呈能力进行研究，并对抗原递呈功能相关分子的表达变化进行分析，初步研究感染细胞对T细胞和B细胞免疫调节的影响，为系统开展环形泰勒虫致病机制和免疫机理的研究提供新的线索。.研究内容.建立环形泰勒虫感染树突状细胞单一克隆细胞系，并实现体外传代培养；比对环形泰勒虫感染前后树突状细胞抗原递呈能力和相关分子表达水平的变化；分析比对环形泰勒虫感染前后树突状细胞活化T细胞和B细胞能力的变化；分析比对在外界刺激物作用下，环形泰勒虫感染的树突状细胞与正常细胞细胞因子表达的变化。 .重要结果.成功建立了环形泰勒虫转化的牛树突状细胞细胞系，并能够在体外传代培养。.分析了树突状细胞感染环形泰勒虫后，细胞表面少量表达MHCII；CD14、CD80和CD86基本不表达。.与正常树突状细胞相比，树突状细胞感染环形泰勒虫后，在转录水平上，细胞因子IL6、TNFα、IFNβ转录水平大幅度提高，IFNα、IL8和IL18转录水平下降。.科学意义. 本项目首次成功建立了环形泰勒虫转化的牛外周淋巴细胞来源的树突状细胞系，为进一步研究环形泰勒虫感染对细胞功能的影响奠定了材料基础。本研究证实环形泰勒虫感染对细胞的表面标志分子及细胞因子的表达具有影响作用，并且对细胞的先天免疫功能具有影响作用，为下一步研究的方向奠定了数据基础。

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