猪肺炎支原体感染相关毒力因子的挖掘

结题报告
项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号:
    31370208
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    80.0万
  • 负责人:
  • 依托单位:
  • 学科分类:
    C0109.病原真菌学与其他微生物
  • 结题年份:
    2017
  • 批准年份:
    2013
  • 项目状态:
    已结题
  • 起止时间:
    2014-01-01 至2017-12-31

项目摘要

Mycoplasma hyopneumoniae is the important pathogen threatening the global pig industry, with persistent infection, long-term contaminated and difficult to clean features. Currently, little is known about the virulence factors of M. hyopneumoniae, which hindered the new vaccine development of M. hyopneumoniae. M. hyopneumoniae strain 168, with clear genetic background, is highly virulence strain of our own separation in our country, and the 168 pro-passage attenuated strains is widely used as vaccine stains in China, and it is good materials for research of M. hyopneumoniae virulence associated factors. This project intends to analysis the protein component of the group of three generations on behalf of different virulence 168 strains and establish difference in protein expression profiles, with the fluorescence difference gel electrophoresis and multidimensional liquid chromatography technology. Then screen M. hyopneumoniae virulence-associated candidate proteins combined with bioinformatics prediction and the 2D-GE fluorescent hybirdization. The project will evaluate the correlation of candidate proteins and virulence through the adhesion, damage degree and Ca2+ releasing level of swine ciliated epithelial cell and the IL-1β and TNF-αsecretion levels and phagocytic capicity of porcine alveolar macrophage cells, confiming new infectious virulece-associated factors. This research will reveal the foundation of the pathogenic mechaism of M. hyopneumoniae.
猪肺炎支原体(Mycoplamsa hyopneumoniae, Mhp)是危害全球养猪业的重要病原,具有持续感染、长期带菌和难以净化的特征。目前,关于Mhp的毒力因子还知之甚少,阻碍了Mhp新型疫苗的研究。Mhp 168株是我国自行分离的强毒株,遗传背景清楚,而且以168株为亲本的传代致弱株已作为疫苗株在我国广泛使用,是研究Mhp毒力相关因子的良好材料。本项目拟采用荧光差异凝胶电泳技术与多维液相色谱技术,对体内感染的Mhp168强弱毒株进行蛋白组学分析,建立差异蛋白表达谱;结合生物信息学预测和2D-GE荧光杂交技术筛选出Mhp毒力相关候选蛋白,并从各候选蛋白对体外气液培养模型中猪纤毛上皮细胞的黏附、损伤程度、Ca2+变化情况、以及对猪肺泡巨噬细胞IL-1β和TNF-α的分泌情况及吞噬能力等三方面评价各候选蛋白与毒力的相关性,确定新的Mhp感染相关毒力因子,为揭示Mhp的致病机制奠定基础。

结项摘要

猪肺炎支原体(Mycoplamsa hyopneumoniae, Mhp)是引起猪气喘病的重要病原,具有持续感染、长期带菌和难以净化的特征。毒力相关因子在支原体的感染与致病中扮演着十分重要的角色,但目前对猪肺炎支原体的毒力相关因子还知之甚少,仅证实部分黏附蛋白与毒力相关,尚难以解释其复杂的致病机制。. Mhp 168株是我国自行分离的强毒株,与其传代致弱株168L的遗传背景十分接近,其毒力差异落脚在蛋白水平,是利用比较蛋白组研究Mhp毒力相关因子的良好材料。本项目采用二维凝胶电泳技术对强毒株和弱毒株的全菌蛋白进行比较分析,发现在KM2培养基培养的条件下,相比弱毒菌株168L,7个蛋白在168强毒株中表达量上调,分别为Molecular chaperone DnaK (DnaK or Hsp70 or P42),Elongation factor Tu (EF-Tu),Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH),Adenine phosphoribosyltransferase (Apt),L-lactate dehydrogenase (LDH or P36),Heat shock protein (GrpE)和Fructose-bisphosphate aldolase (FBA)。这7个差异蛋白全部位于由已知毒力因子构成的互作网络中,且都属于功能比较保守的生长代谢过程中的酶。绝大部分差异蛋白的编码基因属于核心基因。表达量变化最显著的蛋白FBA位于猪肺炎支原体表面,是一个新型的黏附因子。. 利用体外猪气管上皮细胞模型,发现菌株感染细胞后6个蛋白表达量上调,分别为YX2,Pyruvate dehydrogenase,EF-Tu,Enolase,Apt和GAPDH。其中EF-Tu和Enolase位于毒力互作网络中的关键节点位置,且都位于支原体表面。EF-Tu还通过结合纤连蛋白发挥重要的黏附作用。. 综上,本研究筛选出大量猪肺炎支原体毒力相关致病因子,对阐明病原的致病机理,正确认识疾病的发生和发展,研究亚单位疫苗有效防控该病具有重要的意义。

项目成果

期刊论文数量(5)
专著数量(0)
科研奖励数量(2)
会议论文数量(2)
专利数量(8)
猪肺炎支原体抗原定量ELISA检测方法的建立
  • DOI:
    10.16656/j.issn.1673-4696.2017.04.011
  • 发表时间:
    2017
  • 期刊:
    中国兽医科学
  • 影响因子:
    --
  • 作者:
    田瑞雨;熊祺琰;刘茂军;韦艳娜;武昱孜;冯志新;姜平;邵国青
  • 通讯作者:
    邵国青
A replicating plasmid-based vector for GFP expression in Mycoplasma hyopneumoniae
一种基于复制质粒的载体,用于猪肺炎支原体中 GFP 的表达
  • DOI:
    10.4238/gmr.15027832
  • 发表时间:
    2016
  • 期刊:
    GENETICS AND MOLECULAR RESEARCH
  • 影响因子:
    0.4
  • 作者:
    Ishag H. Z. A.;Liu M. J.;Yang R. S.;Xiong Q. Y.;Feng Z. X.;Shao G. Q.
  • 通讯作者:
    Shao G. Q.
Development of a blocking ELISA for detection of Mycoplasma hyopneumoniae infection based on a monoclonal antibody against protein P65.
基于 P65 蛋白单克隆抗体开发用于检测猪肺炎支原体感染的封闭 ELISA
  • DOI:
    10.1292/jvms.15-0438
  • 发表时间:
    2016-09-01
  • 期刊:
    The Journal of veterinary medical science
  • 影响因子:
    --
  • 作者:
    Liu M;DU G;Zhang Y;Wu Y;Wang H;Li B;Bai Y;Feng Z;Xiong Q;Bai F;Browning GF;Shao G
  • 通讯作者:
    Shao G
Transcription analysis of the porcine alveolar macrophage response to Mycoplasma hyopneumoniae.
猪肺泡巨噬细胞对猪肺炎支原体反应的转录分析
  • DOI:
    10.1371/journal.pone.0101968
  • 发表时间:
    2014
  • 期刊:
    PloS one
  • 影响因子:
    3.7
  • 作者:
    Bin L;Luping D;Bing S;Zhengyu Y;Maojun L;Zhixin F;Yanna W;Haiyan W;Guoqing S;Kongwang H
  • 通讯作者:
    Kongwang H
Transcription analysis on response of porcine alveolar macrophages to co-infection of the highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus and Mycoplasma hyopneumoniae
猪肺泡巨噬细胞对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪肺炎支原体感染反应的转录分析
  • DOI:
    10.1016/j.virusres.2014.11.006
  • 发表时间:
    2015-01-22
  • 期刊:
    VIRUS RESEARCH
  • 影响因子:
    5
  • 作者:
    Li, Bin;Du, Luping;He, Kongwang
  • 通讯作者:
    He, Kongwang

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其他文献

一株猪鼻支原体的分离鉴定及致病性研究
  • DOI:
    --
  • 发表时间:
    2021
  • 期刊:
    畜牧兽医学报
  • 影响因子:
    --
  • 作者:
    王佳;华利忠;刘蓓蓓;张磊;袁厅;甘源;韦艳娜;邵国青;冯志新;熊祺琰
  • 通讯作者:
    熊祺琰
猪鼻支原体黏附宿主细胞间接免疫荧光检测方法的建立
  • DOI:
    --
  • 发表时间:
    2014
  • 期刊:
    中国人兽共患病学报
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  • 作者:
    白方方;冯志新;刘茂军;邵国青
  • 通讯作者:
    邵国青
皂树皂苷QS21增强猪支原体肺炎活疫苗滴鼻免疫小鼠效果评价
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    --
  • 发表时间:
    2018
  • 期刊:
    中国兽药杂志
  • 影响因子:
    --
  • 作者:
    张珍珍;韦艳娜;王佳;于岩飞;冯志新;邵国青;熊祺琰
  • 通讯作者:
    熊祺琰
套式PCR检测中国江苏省猪场猪鼻支原体和猪肺炎支原体的感染(英文)
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    --
  • 发表时间:
    2014
  • 期刊:
    中国人兽共患病学报
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    --
  • 作者:
    华立忠;王佳;邵国青;鲍恩东
  • 通讯作者:
    鲍恩东
猪肺炎支原体对上皮细胞氧化损伤的分析
  • DOI:
    --
  • 发表时间:
    2014
  • 期刊:
    畜牧兽医学报
  • 影响因子:
    --
  • 作者:
    李彦伟;刘茂军;刘蓓蓓;武昱孜;倪博;白方方;纪燕;张映;邵国青
  • 通讯作者:
    邵国青

其他文献

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课题项目:调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要:

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题,其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子,其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而,TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用,影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法,探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用,为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义,并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路:

科学问题:TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达?
前期研究:已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应,但其具体机制尚不明确。
研究创新点:本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线:包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术:TRIM2与病毒RNA的相互作用分析,IFN-β启动子活性检测。
实验模型:使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

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          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
      
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