DON、ZEN及其联合作用对体外培养鸡脾脏淋巴细胞凋亡的分子机制研究

针对全球饲料霉菌毒素污染严重，呕吐毒素（DON）和玉米雌霉烯酮（ZEN）在饲料中检出率高达100％。霉菌毒素最重要和最本质的危害是免疫抑制，而脾脏是霉菌毒素作用于免疫系统的主要靶器官。ZEN、DON对鸡脾脏淋巴细胞凋亡的分子机制研究还是空白。本研究通过不同浓度DON、ZEN及联合作用对脾脏淋巴细胞增值分化功能，T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+表达量，淋巴细胞DNA损伤，淋巴细胞分泌的细胞因子，调控基因bc1-2、p53mRNA表达，抗氧化指标，超微结构变化及NO代谢等变化规律的研究，阐明脾脏淋巴细胞凋亡的分子机制。为下一步开展霉菌毒素体内试验提供理论依据，为人类健康、食品安全、饲料去霉剂的研发以及环境保护等方面提供有价值的参考。因此，开展DON、ZEN及其联合应用对体外培养鸡脾脏淋巴细胞凋亡的分子机制研究有着重要的理论价值和学术价值。

本研究以原代培养鸡脾脏淋巴细胞为模型，研究DON、ZEA单独或联合染毒对鸡脾脏淋巴细胞的凋亡损伤效应及其机理。.测定染DON、ZEA后 48h鸡脾脏淋巴细胞的IC50为基础上设计不同浓度的DON、ZEA单独染毒剂量及联合染毒剂量，进行DON、ZEA单独或联合染毒48h对鸡脾脏淋巴细胞的毒性效应。. DON、ZEA及其联合染毒48h，各染毒组：①细胞凋亡率、坏死率、乳酸脱氢酶活性升高。细胞DNA出现片段化条带；细胞呈典型凋亡特征；细胞凋亡率大于坏死率。②SOD、CAT、GSH-Px活性和GSH含量降低。MDA含量变化趋势相反。③胞内活性氧、钙离子水平、CaM mRNA表达水平增加，联合染毒组大于相应剂量单独染毒组。线粒体膜电位水平、胞内pH、Ca2+-ATPase与Na+/K+-ATPase活性均降低。④胞内p53、BAX、Bak-1及Caspase-3 的mRNA表达升高，且Bax mRNA表达水平与Bcl-2mRNA表达水平的比值亦升高。细胞培养上清液中p53、BAX、Bak-1及Caspase-3的含量升高；而bcl-2含量却下降。⑤细胞培养上清中IL-1RI、IL-6、IL-10和IFN-γ蛋白含量增加，IL-1β、IL-2、IL-4和IL-12β蛋白含量降低。胞内IL-1RI、IL-2、IL-4、IL-10和IL-12βmRNA表达量增加，IL-1βmRNA表达量降低。上述实验结果均具有显著的剂量依赖关系，联合染毒组差异更显著。. 结论：在试验条件下，DON或ZEA单独染毒及其联合染毒对机体有如下影响。①鸡脾脏淋巴细胞损伤、DNA片段化及细胞凋亡呈浓度依赖性，联合染毒呈亚加性协同效应；脾脏淋巴细胞凋亡性死亡发挥主导作用。②细胞内抗氧化酶活性降低、氧化产物增加。氧化损伤是细胞凋亡性死亡的重要机制。③鸡脾脏淋巴细胞内环境稳态失衡，促进了细胞凋亡。④上调Bcl-2基因家族基因、抑制Bcl-2基因家族基因中bcl-2基因表达；上调p53基因和Caspase-3基因表达，激活p53和Caspase通路而诱导细胞凋亡增加；两毒素联合表现出亚加性效应。⑤改变促炎性细胞因子的水平。 Th1和Th2细胞因子平衡失调，造成细胞免疫损伤，对细胞产生毒性。

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