基于镧系金属螯合物的时间分辨荧光免疫分析技术在心力衰竭生物标志物检测方面的研究

It is vital to detect biomarkers of heart failure (HF), which is a major and growing public health problem that is associated with substantial morbidity and mortality. Some biomarkers are expressed in extremely low copy numbers, which is difficult to detect by conventional immunoassays. Time-resolved fluoroimmunoassay (TRFIA) using lanthanide chelators as labels is an ultrasensitive immunoassay to meet the challenge. Our preliminary work has established TRFIA system for detection of c-reactive protein, developed capture antibody and detection antibody of copeptin, collected the serum samples of patients with HF. On this basis, this project aims to apply time-resolved fluoroimmunoassay for detection of HF biomarkers copeptin. On one hand, we design and synthesize diverse lanthanide chelators to label detection antibody of copeptin. On the other hand, capture antibody and detection antibody labeled by lanthanide chelators and other fluorophores are served as the energy donor and acceptor of Förster resonance energy transfer, respectively. The results of this project will provide an ultrasensitive detection method for biomarkers of HF and supply a new approach for early warning and early diagnosis of HF.

心力衰竭是造成大量发病率和死亡率的重要公共健康问题，其生物标志物的检测至关重要，而某些生物标志物含量较低，用常规方法灵敏度难以达到。以镧系金属螯合物作为标记物的时间分辨荧光免疫分析技术(time-resolved fluoroimmunoassay，TRFIA)是一种超灵敏的免疫检测方法，可解决常规方法灵敏度较低的问题。前期我们初步建立了用TRFIA检测C反应蛋白的体系，开发了copeptin的配对抗体并收集了心力衰竭患者的血清样本。基于此，本项目拟应用TRFIA检测心力衰竭生物标志物copeptin。一方面用单标记的方法，合成镧系金属螯合物并对检测抗体进行标记；另一方面采用双标记的方法，同时标记捕获抗体和检测抗体，分别作为荧光共振能量转移的供体和受体，实现利用TRFIA在心力衰竭患者血清中检测copeptin的目标。本项目的实施将为预防和诊治心力衰竭提供一种高灵敏度的生物标志物检测方法。

心力衰竭是一种慢性疾病，给医疗系统带来了巨大负担。虽然心力衰竭的治疗及其主要潜在原因已取得了很大进展，但是心衰的发展仍然与严重的预后相关。五年内死亡率可达50%。因此正确的诊断，进行危险分层及预后评估，并予以个体化的治疗对提高患者生活治疗有着重大意义。心力衰竭生物标志物的检测至关重要，而某些生物标志物含量较低，用常规方法灵敏度难以达到。建立灵敏度高，线性范围广，血浆使用量少的心力衰竭生物标志物检测方法具有重要的临床意义。. 在本课题中我们试图合成可发生荧光共振能量转移的受体，此外，我们建立了灵敏度高、线性范围广、血浆使用量少的醛固酮检测方法，进行了血浆醛固酮水平在心衰患者死亡或心衰再住院风险预测作用的研究，分别评价其在HFrEF和HFpEF患者全因死亡或心衰再住院风险预测中的价值。并进行了包括醛固酮在内的类固醇激素在心力衰竭预后评估方面的研究。. 本课题发现在心力衰竭患者中，随着血浆醛固酮水平的增加，全因死亡和心衰再住院复合风险增加，血浆醛固酮水平和HFrEF和HFpEF的不良预后相关，可通过醛固酮对心力衰竭患者进行危险分层，减少治疗延误导致的死亡，减少住院时间，减少侵入性检查，优化医疗资源配置。

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